Методические указания по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями

2. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА

Бактериологическому исследованию на наличие энтеробактерий может быть подвергнут различный материал, получаемый от людей; показания к его исследованию, правила взятия, подготовки к посеву и выбор питательных сред различны. Однако, начиная с отбора колоний на пластинчатых средах, последующие этапы бактериологического исследования (определение родовой, видовой принадлежности выделенных культур, их серологических характеристик и др.) идентичны (см. схему 1).

2.1. Материал для исследования

Обоснованные показания к проведению бактериологического исследования того или иного материала и правильное его взятие в значительной мере определяют эффективность действий бактериолога. В определении характера подлежащих исследованию материалов, сроков их взятия ведущее значение принадлежит врачам-клиницистам и эпидемиологам. Основные показания к исследованию различных клинических материалов приведены в табл.2.

Таблица 2. Показания к бактериологическим исследованиям различного клинического материала

     

СХЕМА I
бактериологического исследования на энтеробактерии

________________

* Для некоторых материалов (мокрота, спинномозговая жидкость, гной и т.п.) целесообразна предварительная бактериоскопия.

Повышению высеваемости, в частности патогенных энтеробактерий, способствует повторное (до 3-4 раз) исследование соответствующего материала.

Общим требованием к процедуре отбора проб клинических материалов является обеспечение условий, исключающих контаминацию (загрязнение) материала микроорганизмами из смежных областей тела и окружающей среды. Материал для бактериологического исследования целесообразно брать до начала антибиотико-(химио-)терапии. Судна, горшки и другие емкости для сбора испражнений должны быть тщательно вымыты и лишены следов дезинфицирующих средств.

Материал собирают в стерильную посуду, снабжают наклейкой с указанием фамилии обследуемого и наименования материала. В сопроводительном документе указывают учреждение, направляющее материал, анкетные данные обследуемого: фамилия, имя, отчество, возраст, место работы и должность (для детей, посещающих детские учреждения, указывают название соответствующего детского учреждения), дату заболевания, диагноз или другие показания для обследования; наименование материала, дату и час взятия пробы, цель исследования, первичность или повторность исследования (при повторных исследованиях необходимо указать дату и результат первичного обследования), фамилию и должность лица, направляющего материал.

Испражнения собирают сразу после дефекации из судна, горшка, специального лотка или с пеленки с помощью стерильной стеклянной палочки, проволочной петли или деревянного шпателя. При наличии в испражнениях патологических примесей (слизь, хлопья, гной) их следует включить в отбираемую пробу. Испражнения можно получить непосредственно из прямой кишки с помощью ректальных тампонов, ватных или ватно-марлевых, укрепленных на металлической петле или деревянной палочке, а также применяя для извлечения фекалий специальные проволочные петли.

При профилактических обследованиях здоровых лиц на носительство сальмонелл возможно применение солевого слабительного (25-30 г магнезии сульфата - ) в теплом виде и предпочтительно накануне дня взятия испражнений на исследование.

Испражнения, не помещенные в консервант, суспендируют в ИХН в соотношении 1:5 или 1:10 и засевают не позднее 2 часов после взятия. При использовании консервантов оптимальны те же сроки, но материал пригоден для исследования еще в течение 12-24 часов. Объем испражнений, вносимых в консервант, не должен превышать 1/3 его объема, после внесения в пробирку испражнения следует перемешать. Материал, помещенный в консервант, сохраняют до начала исследования при 4-6 °C.

В качестве консервантов (транспортных сред) используют забуференный глицериновый, фосфатно-буферный консерванты (pH 8,0), а также ИХН. При исследованиях на наличие иерсиний глицериновый консервант непригоден. По возможности исследуемый материал сохраняют при 4-6 °C вплоть до учета результата посевов на пластинчатые среды, а при целенаправленном исследовании на иерсинии - до 14 дней (с целью накопления).

Кровь для исследования берут стерильным шприцом с соблюдением правил асептики из локтевой вены в объеме 2-10 мл (в зависимости от возраста) и засевают у постели больного в соотношении 1:10 во флаконы со средой Рапопорт, 10-20% желчным бульоном или в стерильную дистиллированную (водопроводную) воду. Использование сред с желчью предпочтительно. При взятии крови в более поздние сроки и при слабо выраженной клинической картине заболевания объем засеваемой крови увеличивают до 15-20 мл, сохраняя то же соотношение крови и питательной среды (1:10). У детей до 1 года кровь берут в доступных количествах из пальца, пятки или мочки уха с соблюдением правил асептики.

При необходимости исследованию могут быть подвергнуты сгустки крови (после отделения сыворотки), доставленной в лабораторию для серологических исследований. Сгусток крови измельчают в пробирке с помощью стеклянной палочки и засевают (в соотношении 1:10) в среду Рапопорт или желчный бульон.

Рвотные массы и промывные воды желудка берут для исследования в объеме до 100 мл материала. При кислой реакции рвотные массы перед посевом нейтрализуют 10% раствором питьевой соды . Исследованию подлежат первые порции промывных вод, полученные без использования при промывании дезинфицирующих средств ( или др.); перед посевом промывные воды центрифугируют и засевают их осадок.

Соскоб розеол исследуют при наличии хорошо выраженных розеол. Участок кожи над ними обрабатывают спиртом, промывают стерильным ИХН, осушают стерильной марлей и подвергают скарификации. На поврежденную кожу наносят 1-2 капли желчного бульона или ИХН, затем собирают материал пастеровской пипеткой или небольшим кусочком стерильной ваты и опускают в пробирку с желчным бульоном.

Желчь (дуоденальное содержимое). Возможность проведения дуоденального зондирования определяет врач-клиницист. Материал собирают в отдельные стерильные пробирки, порции A, B, C, соответственно - дуоденальное содержимое, пузырную желчь и желчь из желчных протоков. Дуоденальное содержимое и желчь имеют зеленовато-желтый цвет и щелочную реакцию (последнюю проверяют индикаторными бумажками). Кислая реакция, белесоватый оттенок жидкости, наличие хлопьев свидетельствуют о примеси желудочного сока, такой материал непригоден для исследования на наличие энтеробактерий.

Моча. После обмывания наружных половых органов и спускания начальных порций мочи собирают 20-30 мл мочи в стерильную баночку (флакон). Доставленную в лабораторию мочу перед посевом центрифугируют и засевают осадок или используют для посева нативную мочу.

Гной, пунктаты органов, экссудат получают с помощью стерильного шприца или ватного (марлевого) тампона, при возможности сразу засевают на соответствующие питательные среды или пересылают в стерильных пробирках в лабораторию.

Слизь из зева, носа, уха, отделяемое шейки матки забирают с помощью стерильного ватного (марлевого) тампона, помещают в пробирки с ИХН, с СПБ или без них и пересылают в лабораторию.

Операционный материал (кусочки органов и тканей, извлекаемые при оперативных вмешательствах, содержимое удаленного червеобразного отростка, желчного, мочевого пузыря и др.) помещают в стерильные стеклянные баночки или пробирки, отдельные для каждого вида материала, и доставляют в лабораторию, следуя общим правилам.

Спинномозговую жидкость получают при люмбальной пункции в объеме 3-5 мл и помещают в стерильную пробирку. При транспортировке предохраняют от охлаждения (может быть использован термос).

Секционный материал берут на месте вскрытия, соблюдая правила асептики. В лабораторию направляют участки кишки длиной 8-10 см, с целью получения которых с обоих концов намеченного участка накладывают двойные лигатуры и разрезают кишку между этими лигатурами. Кровь из сердца или синуса твердой мозговой оболочки и желчь из желчного пузыря берут в объеме 3-5 мл с помощью пастеровской пипетки. Место прободения пипеткой стенки соответствующего органа предварительно прижигают шпателем. Кусочки тканей и органов вырезают из глубины стерильным скальпелем или ножницами также после предварительного обжигания поверхности. Каждый образец органа, ткани и т.п. помещают раздельно в стерильную посуду. Кусочки тканей и органов могут быть использованы для посева на месте изъятия органов методом отпечатков или после получения суспензии их в ИХН или СПБ путем растирания в ступке.

2.2. Посев материала и выделение чистой культуры