МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями

Методические указания разработаны:

Центральным Ордена Ленина институтом усовершенствования врачей Минздрава СССР (С.Д.Татаринова);

Центральным научно-исследовательским институтом эпидемиологии Минздрава СССР (В.А.Килессо, Н.С.Прямухина, Ю.Я.Тендетник, Г.В.Ющенко);

Центральным научно-исследовательским институтом вакцин и сывороток имени И.И.Мечникова Минздрава СССР (И.В.Голубева, Б.С.Киселева, Н.А.Хоменко);

Санитарно-эпидемиологической станцией Московской железной дороги (Ю.М.Крюков)

Редакционная комиссия:

Килессо В.А., д.м.н., профессор

Крюков Ю.М., к.м.н.

Прямухина Н.С., к.м.н. (заместитель председателя)

Татаринова С.Д., к.м.н., доцент (председатель)

Томашевич В.А., к.м.н. (секретарь)

Хоменко Н.А., д.б.н.

Ющенко Г.В., к.м.н.

УТВЕРЖДАЮ

Заместитель министра здравоохранения СССР П.Н.Бургасов 17.12.1984.

ВВЕДЕНИЕ

За последние 15-20 лет в научных и практических учреждениях нашей страны предложены и апробированы эффективные и научно обоснованные методы выделения и идентификации энтеробактерий. Разработаны и частично внедрены в производство новые диагностические препараты: питательные среды, сыворотки, высокоспецифические диагностикумы, системы для ускоренной идентификации, препараты бактериофагов и некоторые другие реагенты.

В представленный документ включены методы классической бактериологической диагностики заболеваний, вызываемых энтеробактериями, ускоренные методы идентификации и выявления антигенов энтеробактерий, а также методы серологической диагностики соответствующих заболеваний и сведения о приготовлении ряда необходимых питательных сред.

"Методические указания..." преследуют цель унификации методов проведения лабораторной диагностики с применением современных приемов, позволяющих идентифицировать любые из известных в данное время представителей энтеробактерий*. Внедрение в практику данных методических указаний будет способствовать повышению уровня микробиологической диагностики в стране.

________________

* "Инструкцию по микробиологической диагностике кишечных заболеваний, вызванных шигеллами, сальмонеллами и энтеропатогенными кишечными палочками", утв. нач. ГСЭУ Минздрава СССР 11.05.66 г. N 629-66, считать утратившей силу.

В "Методических указаниях..." представлены также разделы по определению эпидемиологических маркеров штаммов энтеробактерий.

Принятые в тексте сокращения:

УПЭ - условно патогенные энтеробактерии;

ЭПЭ - энтеропатогенные эшерихии;

ЭМС - агар с эозин-метиленовым синим;

ВСА - висмут-сульфит агар;

ИХН - изотонический раствор хлорида натрия;

СПА - слабощелочной питательный агар;

СПБ - слабощелочной питательный бульон;

РПГА - реакция пассивной гемагглютинации.

Общее примечание

1. Идентификацию выделенных энтеробактерий по биохимическим свойствам до уровня рода и вида проводят во всех бактериологических лабораториях санитарно-эпидемиологических станций и лечебно-профилактических учреждений.

2. Серологическую идентификацию шигелл до уровня сероваров (и подсероваров), сальмонелл - до сероваров, энтеропатогенных эшерихий - до ОК-серогрупп проводят во всех указанных лабораториях.

3. Исследования с целью серологической диагностики заболеваний (бактерионосительства) проводят по указанию клинициста или эпидемиолога во всех указанных лабораториях.

4. Определение эпидемиологических маркеров штаммов упомянутых патогенных энтеробактерий - биоваров, сероваров (энтеропатогенных эшерихий), фаговаров, колициногеноваров, колициноваров - проводят по эпидемиологическим показаниям и наличии соответствующих условий в лабораториях республиканских, краевых, областных, городских (в городах с районным делением) санитарно-эпидемиологических станций.

5. Определение сероваров и биоваров условно патогенных энтеробактерий проводят по эпидемиологическим показаниям в лабораториях, перечисленных в п.4.

1. КЛАССИФИКАЦИЯ И НОМЕНКЛАТУРА ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ

В настоящее время определение таксономических категорий в бактериологии основано на сочетании морфологических, тинкториальных, биохимических, генетических и других биологических характеристик.

Классификация и номенклатура энтеробактерий в данных "Методических указаниях" приняты в соответствии с широко известным 8-м изданием Bergey's Manual (1974)*.

________________

* На русском языке издан его сокращенный вариант - Краткий определитель бактерий Берги (1980).

С целью унификации и правильности написания названий бактерий Международным кодексом номенклатуры бактерий (1975) сформулированы определенные правила. В частности, наименование бактерий следует писать только по-латыни, при этом род - с заглавной буквы, а видовой эпитет - со строчной. Например: Salmonella typhi, или сокращенно S. typhi. Рекомендовано также при внутривидовой дифференциации употреблять термины фаговар вместо фаготип, серовар вместо серотип и т.д.

Семейство Enterobacteriaceae объединяет обширную группу грамотрицательных палочек подвижных или неподвижных, образующих или не образующих капсулы, некислотоустойчивых, не образующих спор, аэробов или факультативных анаэробов. Они образуют кислоту при ферментации глюкозы, цитохромоксидазоотрицательны, восстанавливают нитраты до нитритов (кроме некоторых штаммов Erwinia). Характеристики отдельных родов и видов приведены далее.

В таблице 1 представлены основные таксономические категории и номенклатура энтеробактерий.

Таблица 1. Классификация семейства Enterobacteriaceae
(по Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 1974)

Классификация семейства Enterobateriaceae, предложенная Юингом (W.Ewing, 1967-1972) и имеющая признание до настоящего времени, по некоторым позициям расходится с Определителем бактерий Берги. Поэтому считаем необходимым указать на наиболее существенные расхождения.

Так, в Определителе Берги не упоминается Klebsiella oxytoca, фактически представляющая биовар K. pneumoniae, отличающийся по тестам на индол и желатин. В классификации Юинга K. oxytoca рассматривают как самостоятельный вид. В роду Serratia по Берги имеется единственный вид - S. maroescens, а Юингом в этот род включены еще два вида: S. liquefaciens и позднее S. rubideae. У Берги имеется вид Proteus inconstans, по Юингу это род Providencia. В Определителе Берги в род Citrobacter включены два вида: C.freundii и C.intermedius. У Юинга имеется третий вид - C. diversus, который является биоваром C. intermedius.

Эти сопоставления приведены лишь для справок, так как в "Методических указаниях..." принята классификация по Берги.

2. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА

Бактериологическому исследованию на наличие энтеробактерий может быть подвергнут различный материал, получаемый от людей; показания к его исследованию, правила взятия, подготовки к посеву и выбор питательных сред различны. Однако, начиная с отбора колоний на пластинчатых средах, последующие этапы бактериологического исследования (определение родовой, видовой принадлежности выделенных культур, их серологических характеристик и др.) идентичны (см. схему 1).

2.1. Материал для исследования

Обоснованные показания к проведению бактериологического исследования того или иного материала и правильное его взятие в значительной мере определяют эффективность действий бактериолога. В определении характера подлежащих исследованию материалов, сроков их взятия ведущее значение принадлежит врачам-клиницистам и эпидемиологам. Основные показания к исследованию различных клинических материалов приведены в табл.2.

Таблица 2. Показания к бактериологическим исследованиям различного клинического материала

     

СХЕМА I
бактериологического исследования на энтеробактерии

________________