Помещают в прибор пустую кювету или кювету с дистиллированной водой. Устанавливают нуль. Далее в кюветы с холостой пробой и пробой, подготовленной по 8.4, с помощью пипетки или дозатора вносят раствор N 1, раствор N 2, в количествах и в последовательности, указанных в таблице 1, затем в кювету с холостой пробой вносят бидистиллированную воду, в кювету с пробой - соответственно 0,10 см пробы, подготовленной по 8.4, и бидистиллированную воду.
Таблица 1
Наименование раствора и порядок внесения растворов в кюветы | Кювета с холостой пробой | Кювета с пробой, подготовленной по 8.4 |
Раствор N 1, приготовленный по 8.3.1 | 1,00 см | 1,00 см |
Раствор N 2, приготовленный по 8.3.2 | 0,10 см | 0,10 см |
Проба, подготовленная по 8.4 | - | 0,10 см |
Бидистиллированная вода | 1,80 см | 1,70 см |
Раствор N 3, приготовленный по 8.3.3 | 0,05 см | 0,05 см |
Содержимое обеих кювет перемешивают пластиковыми шпателями или стеклянными палочками. Через шесть минут измеряют оптическую плотность в кювете с холостой пробой и в кювете с пробой продукта, соответственно. Затем в каждую кювету добавляют раствор N 3 в количестве, указанном в таблице 1. Вновь перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой. Помещают в прибор кювету с воздухом или с дистиллированной водой. Через 20 мин измеряют оптическую плотность в кювете с холостой пробой и с пробой продукта соответственно. Выполняют два параллельных определения.
Примечание - Время, необходимое для протекания ферментативной реакции, может варьироваться. Для установления времени протекания реакции рекомендуется перед каждой серией определений провести определение в растворе с известной массовой концентрацией D-яблочной кислоты.