8.1 Вычисление активности химозина и пепсина, выражаемой в процентах
Активность химозина и говяжьего пепсина, выраженную в международных единицах свертываемости ММЕ/см
, как указано в ISO 11815|IDF 157, можно пересчитать на активность химозина а
, %, и говяжьего пепсина а
, %, используя формулы соответственно
, (1)
а=100- а, (2)
где n - содержание химозина, выраженное в ММЕ/см;
n - содержание пепсина, выраженное в ММЕ/см.
8.2 Вычисление активности химозина и говяжьего пепсина, в миллиграммах на дм
Концентрацию активного химозина и говяжьего пепсина выражают в миллиграммах на дм, если для приготовления субстрата используется стандартный молочный порошок. Коэффициенты К, К, f и f для стандартного молочного порошка предоставлены поставщиком (Cecalait)
. Концентрацию 
(или 
или 
) химозина или говяжьего пепсина в ферментном препарате, мг/дм, вычисляют по формуле
_________________
Cecalait, rue de Versailles, B.P. 70129, 39802 POLIGNY, FRANCE (e-mail: secretariat@cecalait.fr). Информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не свидетельствует о поддержке поставщика этого продукта со стороны ISO или IDF.
, (3)
где К
(или К, или К) - коэффициент, применяемый для вычисления концентрации активного химозина или говяжьего пепсина, мг/дм;
t (или t, или f) - время свертывания, полученное с использованием 0,5 см фракции 1, с;
f - поправочный коэффициент f или f для времени задержки коагуляции, с;
V - объем обессоленного препарата, используемого для анализа (7.6), см;
V - объем собранной фракции (V=50 см), см;
d - коэффициент разбавления или концентрации анализируемой фракции (например, d=3, когда 1 см фракции был разбавлен 2 см буфера для проведения испытания на свертываемость, и d=0,25, когда вместо 0,5 см использовались 2 см для 25 см молока при испытании на свертываемость);
t
- время свертывания, полученное с разбавленным ферментным препаратом (7.5), с;
t
- время свертывания, полученное с обессоленным ферментным препаратом в том же разбавлении (7.5.2 или 7.5.3), с.
Для конкретного порошкового молока и конкретного ферментного препарата поправочный коэффициент f получают путем построения графика времени свертывания относительно 1/
(см. пример). В соответствии с формулой Хольтера t=f+b/с, где f - это экстраполированное значение t для b/с=0. Поставщик стандартного порошкового молока также дает коэффициент f.
Пример - Для определения константы f для фракции химозина готовят 100 см концентрированного раствора чистого химозина в буферном растворе II (4.12.2). Этот препарат может быть получен из одного или нескольких разделений телячьего сычужного фермента (первая фракция) на хроматографе. Затем готовят не менее шести разных разбавлений этого препарата буферным раствором II (4.12.2).
Определяют время свертывания разных разбавлений в соответствии с методом, установленным в ISO 11815|IDF 157. Время свертывания следует равномерно распределить от 240 до 1200 с.
Значение для наименьшего разбавления (время свертывания около 300 с) принимают за 1,00, а значения для других разбавлений устанавливают в зависимости от этого, например, 0,50 (1/2), 0,33 (1/3), 0,25 (1/4), и т.д. Строят график t=d(1/) и вычисляют поправочный коэффициент r. Если r равен или больше 0,999, можно определить константу f, если r меньше 0,999, делают новые разбавления и повторяют измерение времени свертывания.
Для определения константы f для фракции говяжьего пепсина готовят 100 см концентрированного раствора чистого говяжьего пепсина в буферном растворе III (4.12.3). Этот препарат может быть получен из одного или нескольких разделений ферментного препарата из сычугов крупного рогатого скота (вторая фракция) на хроматографе. Затем готовят не менее шести разных разбавлений этого препарата буферным раствором III (4.12.3).
Определяют время свертывания в тех же временных пределах, как указано для фракции химозина, и вычисляют r. Если r равно или больше 0,999, можно определить константу f.
8.3 Выражение результатов
