МУК 4.2.3145-13 Лабораторная диагностика гельминтозов и протозоозов

Методы исследования нативных и окрашенных мазков

Отбор биологического материала

Исследованию на цистный эхинококкоз подлежат: содержимое паразитарной кисты, ее оболочки, мокрота больного (при эхинококкозе легких), промывные воды при лаваже бронхов (в случаях вскрытия кисты в бронх), желчь (при подозрении на прорыв кисты в желчные протоки), содержимое брюшной и плевральной полостей (при вскрытии кист в полости), содержимое дренажной жидкости в разные сроки после операции, при бронхоскопии, плевральной пункции, дуоденальном зондировании.

Исследованию на цистный эхинококкоз подвергают также материал, полученный при биопсии во время операции, пункционной биопсии печени, открытой биопсии при лапаротомии или торакотомии, на секции.

Необходимое оборудование, инструменты, реактивы

Ножницы

Пинцеты

Мельничный газ с диаметром ячеек 0,3 мм

Стеклянные стаканчики объемом 0,5-0,7 л

Чашки Петри

Пластмассовые одноразовые пипетки

Предметные стекла

Хирургические перчатки

Изотонический раствор хлорида натрия

Концентрированный раствор антибиотиков (пенициллин 2000 ЕД/мл + гентамицин 0,3 ЕД/мл, разведенные в физиологическом растворе)

Эмалированные кюветы

Стереомикроскоп

Световой микроскоп

Подготовка к исследованию

1) Для исследования содержимое кисты, мокроту, желчь и другие объекты исследования собирают в стерильную пробирку для посева на стерильность, выделения микрофлоры и определения ее чувствительности к антибиотикам.

2) Остальную часть материала собирают в центрифужную пробирку и центрифугируют.

3) Из осадка приготовляют нативные и окрашенные мазки. Для окраски мазков используют краску Романовского-Гимзы, азур II, эозин.

4) Нативные и окрашенные мазки просматривают под микроскопом при малом и большом увеличении.

5) Для гистологического исследования кусочки стенки кисты или только кутикулярной оболочки размерами 11 см фиксируют в нейтральном формалине, жидкости Карнуа.

6) Материал для гистологического исследования заливают в парафин; срезы толщиной 4-6 мкм окрашивают гематоксилин-эозином, пикрофуксином по Ван-Гизон, азур-эозином, PAS-реакцией, реактивом Шиффа на нуклеиновые кислоты по методу Браше и Фельгена.

Результаты исследования

При микроскопическом исследовании выявляют свободные или заключенные в выводковых капсулах юные и зрелые ввернутые и вывернутые протосколексы, фрагменты герминативной и кутикулярной (хитиновой) оболочек, известковые тельца, отпавшие от протосколексов большие и малые крючья, микроскопические ацефалоцисты (рис.2-5).

При незрелых кистах (не содержащих протосколексы) основным диагностическим признаком цистного эхинококкоза является кутикулярная оболочка и ее фрагменты. Иногда при вскрытии кисты в бронх или брюшную полость выделяются крупные фрагменты кутикулярной оболочки или вся оболочка. Микроскопическая кутикулярная оболочка легко идентифицируется по характерной ярко выраженной слоистости, не утрачиваемой даже при некротических изменениях. Микроскопически кутикулярная оболочка представляет собой плотную эластическую ткань белого или желто-белого цвета.

При зрелых цистах (содержащих протосколексы) наличие юных и зрелых протосколексов является важным прямым диагностическим признаком цистного эхинококкоза, а оценка инвазивности и деструктивных изменений протосколексов является косвенным признаком жизнеспособности ларвоцисты эхинококка у больных, подвергнутых специфической химиотерапии.