МУК 4.2.3145-13 Лабораторная диагностика гельминтозов и протозоозов

1.1.1.2.3. Модификация метода седиментации с применением одноразовых концентраторов "PARASEP"

Необходимые реактивы и оборудование

Комплект концентраторов (разборные пластиковые пробирки) 40 шт., содержащие необходимые для работы готовые реактивы

Центрифуга

Микроскоп

Пипетки

Обезжиренные предметные и покровные стекла

Подготовка к исследованию

1) В смесительной камере пробирки-концентратора содержится 2,4 мл 10%-го буферного раствора формалина с 1 каплей тритона-Х-100.

2) Перед взятием пробы добавляют в пробирку 0,9 мл раствора этилацетата (флакон с реактивом прилагается в упаковке с модулями "PARASEP").

3) Пробу кала массой 1,0 г лопаткой-фильтром опускают в полученный раствор.

4) Камеру с образцом присоединяют к пробирке, закрыв замок (закрутить до щелчка). Тщательно встряхивают систему в течение 30 с до получения однородной взвеси.

5) В таком состоянии образец может храниться в течение 24 ч при комнатной температуре (18-24°С) и до 30 суток в холодильнике (4°С).

6) После получения взвеси систему переворачивают и конической стороной помещают в центрифугу и центрифугируют при скорости 2500-3000 об./мин в течение 1-3 мин, при скорости 1500 об./мин - 5 мин.

7) В конической части пробирки остается жидкая часть пробы с выделившимися в нее яйцами гельминтов, цистами простейших.

8) Отсоединяют модуль с фильтром (держать строго вертикально!), избегая перемешивания жидкости с осадком. Фильтровальный модуль утилизируется после обеззараживания (кипячением, автоклавированием). Коническая часть пробирки остается для микроскопирования.

9) При образовании "пробки" из этилацетата и жировых частиц необходимое удалить, обведя стеклянной палочкой.

10) Для микроскопирования с помощью пипетки из нижней пробирки на предметное стекло переносят 2 капли пробы осадка.

11) Осадок суспендировать: одна капля осадка помещается на предметное стекло, а во вторую каплю наносится 2%-й раствор Люголя. Препараты накрываются покровными стеклами.

12) Микроскопируют при увеличении: окуляр 10, объективы 10, 40.

13) При использовании для микроскопии рабочей станции FE-5 из процесса исследования можно исключить предметные и покровные стекла.

Примечание. Если пробы кала доставлены в консерванте (например, Турдыева), то их центрифугируют при 1000-1500 об./мин, надосадочную часть сливают. Осадок исследуется согласно пп.1-12.

Применение. Метод модификации облегчает визуализацию искомых патогенов, обеспечивает их качественное и количественное определение в субстрате; исключает необходимость приобретения дополнительных реактивов.