МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

     

ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗ И ИЕРСИНИОЗ (эпидемиология, клиника, диагностика, терапия)

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России С.И.Иванов, 11.05.2004 г., N 11-3/8-09

Методические рекомендации содержат современные сведения по эпидемиологии иерсиниозов, особенности клинических проявлений и детальное освещение вопросов дифференциальной диагностики иерсиниозов с различными инфекционными и терапевтическими болезнями.

Особое внимание уделено методам обнаружения возбудителей (антигенов), эффективным средствам специфической диагностики.

Методические рекомендации предназначены эпидемиологам, инфекционистам, педиатрам и микробиологам.

Методические рекомендации разработаны специалистами:

ФГУ "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Пастера" - д.м.н. проф. Г.Я.Ценевой, н.с. Г.И.Кокориной, к.б.н. Е.А.Воскресенской; к.м.н. О.А.Шендерович;

ФГУ "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт детских инфекций" - д.м.н. проф. В.В.Ивановой, д.м.н. О.В.Тихомировой, к.м.н. М.К.Бехтеревой;

Министерства здравоохранения и социальной политики Российской Федерации - главным специалистом Т.Н.Фролочкиной.

Рецензенты: профессор В.В.Тэц

                              профессор О.И.Кошиль

ВВЕДЕНИЕ

Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica широко распространены во многих странах мира, являясь причиной cпорадической и групповой заболеваемости, при этом псевдотуберкулез характерен, в основном, для территорий с умеренным и холодным климатом.

В России псевдотуберкулез регистрируется практически повсеместно, однако наиболее высокие показатели заболеваемости характерны для Сибирского региона (в 2003 г. 24,45 на 100 тыс.), Дальнего Востока (10,52 на 100 тыс.) и Северо-Запада (9,75 на 100 тыс.), включая Санкт-Петербург. Заболеваемость иерсиниозом в указанных регионах также примерно в 2-2,5 раза превышает заболеваемость по стране: показатели на 100 тыс. в 2003 г. составили 2,95; 3,08 и 4,39, соответственно.

Дети болеют псевдотуберкулезом, как и иерсиниозом, в 4-5 раз чаще, чем взрослые. В последние годы отмечается тенденция к росту рецидивирующих и хронических форм.

Надо полагать, что фактическая заболеваемость, особенно иерсиниозом, значительно выше официально зарегистрированной, т.к. лабораторная диагностика данных инфекций до настоящего времени остается неунифицированной. Лабораторное подтверждение псевдотуберкулеза в Санкт-Петербурге в последние годы находится на уровне 50%. В то же время во многих регионах России оно существенно ниже. Имеющийся на вооружении практики набор диагностических методов и средств для обнаружения возбудителей и их антигенов, определения специфических антител используется ограниченно и без учета особенностей клинического течения и периода болезни. Продолжает снижаться объем проводимых лабораторных исследований с диагностической целью, а также объектов внешней среды, продуктов питания, мелких млекопитающих, как с профилактической целью, так и по эпидемиологическим показаниям. Это приводит к искажению данных об уровне заболеваемости псевдотуберкулезом и иерсиниозом, тормозит расшифровку ОИЗ неясной этиологии, равно как и снижает эффективность эпиднадзора за инфекциями. Принадлежность Y. enterocolitica к 4 группе условно-патогенных бактерий также отрицательно влияет на обязательность проведения бактериологических исследований на этот вид микроорганизмов. Следует подчеркнуть, что вид Y. enterocolitica объединяет большое число серотипов, чрезвычайно гетерогенных по своим вирулентным свойствам. Существуют также различия в проявлении патогенных свойств не только в пределах видов иерсиний, но также внутри отдельных серологических вариантов: от выраженной степени до их отсутствия у отдельных представителей. В этой связи определение патогенности изолированных иерсиний является обязательной.

В настоящее время серотипирование иерсиний на ряде территорий России не проводится. Имеющийся набор коммерческих поликлональных диагностических сывороток не велик, а моноклональные сыворотки, разработанные в России, не имеют промышленного производства. Между тем серологическое типирование является обязательным. Оно необходимо для оценки этиологической значимости выделенных бактерий, а также регистрации новых серотипов в целях усовершенствования диагностики.

Вследствие полиморфизма клинических проявлений псевдотуберкулез и иерсиниоз могут сопровождаться проявлениями, сходными с аналогичными признаками 36 нозологических форм. В этой связи для повышения эффективности диагностики важно освещение вопросов дифференциальной диагностики иерсиниозов с различными инфекционными, терапевтическими и хирургическими болезнями.

Для совершенствования лабораторной диагностики представлены экспресс-методы, в том числе ПЦР, определены наиболее информативные биологические субстраты и оптимальные сроки их исследования, предложена общая тактика лабораторной диагностики заболеваний, обусловленных иерсиниями.

1. ПОКАЗАНИЯ И ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ МЕТОДА

Клинико-дифференциальную диагностику иерсиниоза и псевдотуберкулеза следует проводить с приведенным ниже перечнем инфекций во избежание гипо- и гипердиагностики.

Методы лабораторной диагностики иерсиниоза и псевдотуберкулеза необходимо внедрить во всех регионах России в качестве унифицированных.

Противопоказаний нет.

2. МАТЕРИАЛЬНО-ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ МЕТОДА

     
Оборудование:

- стандартное оборудование для бактериологических лабораторий;

- стандартное оборудование для серологических лабораторий;

- стандартное оборудование для иммунологических лабораторий.

Диагностические наборы:

- сыворотки диагностические к Yersinia enterocolitica и Yersinia pseudotuberculosis распространенных сероваров О-моновалентные кроличьи сухие для РА на стекле;

- сыворотка диагностическая к вирулентным Yersinia enterocolitica адсорбированная кроличья сухая для РА на стекле (СВИ) (НИИЭМ им.Пастера, г.Санкт-Петербург) утв. МЗ 25.02.03;

- "Тест-система иммуноферментная для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза I серовара" (НИИЭМ им.Пастера, г.Санкт-Петербург) утв. МЗ 1995 г.;

- наборы для ПЦР "Иерпсевдоамплитест" и "Иерсэнтероамплитест" производства ЗАО "Ниармедик плюс" (г.Москва);

- "Латексный псевдотуберкулезный диагностикум" (Санкт-Петербургский НИИ вакцин и сывороток), рег. N 92/203/17;

- диагностикум эритроцитарный псевдотуберкулезный антигенный сухой (Санкт- Петербургский НИИ вакцин и сывороток) рег. N 94/161/71;

- диагностикум эритроцитарный кишечноиерсиниозный О:3 антигенный сухой (Санкт- Петербургский НИИ вакцин и сывороток) рег. N 94/161/383;

- диагностикум эритроцитарный кишечноиерсиниозный О:9 антигенный сухой (Санкт- Петербургский НИИ вакцин и сывороток) рег. N 94/161/383.

Питательные среды:

- питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза, рег. N 97/306/5;

- среда для определения чувствительности к антибиотикам (АГВ) (ФС 42-3521-98, НПО "Питательные среды");

- агар Хоттингера (МУК 4.1/4.2.588-96, с.46);

- бульон Хоттингера (МУК 4.1/4.2.588-96, с.45);

- среда Игла, рег. N 94/16/81;

- сыворотка крупного рогатого скота, рег. N 91/28/5;

- пептон ферментативный, ГОСТ 13805-76Е;

- питательная среда для выделения энтеробактерий сухая (агар+Эндо-ГРМ) (ГПЦПЦ, Оболенск), рег. N 98/306/5.

Химические реактивы:

- двузамещенный фосфорно-кислый калий (KНРО), ГОСТ 2493-75;

- фосфатно-солевой буфер, кат. N В-60201;

- натрий хлористый, ГОСТ 4233-77;

- KОН, СТ СЕВ 1439-78*.

_______________

* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: СТ СЭВ 1439-78**;

** На территории Российской Федерации действует ГОСТ 24363-80. - Примечание изготовителя базы данных.

3. ОПИСАНИЕ МЕТОДА

     
3.1. Этиология псевдотуберкулеза и иерсиниоза

Возбудители псевдотуберкулеза и иерсиниоза - микроорганизмы рода Yersinia семейства Enterobacteriaceae. Возбудитель псевдотуберкулеза впервые был выделен в 1883 г. L.Malasses и W.Vignal. Несколько позже C.Eberth (1886), выделив культуру и изучив ее на лабораторных животных как спонтанно болеющих, так и зараженных в эксперименте, отметил сходство патологоанатомических изменений внутренних органов погибших животных с таковыми при туберкулезной инфекции и назвал изучаемый микроорганизм "псевдотуберкулезным". У человека этот микроорганизм вызывает заболевание, сопровождающееся энтеритами, энтероколитами и тяжелой генерализованной инфекцией с множественными поражениями отдельных органов и систем.

Первые сведения о выделении Y. enterocolitica из клинического материала от больных людей появились в США в 1939 г. (Schlifstein J., Coleman N.). С 1962 года после регистрации эпизоотий, вызванных Y. enterocolitica среди шиншилл, микроорганизмы были изучены, идентифицированы и по предложению W. Frederiksen (1964) названы Y. enterocolitica. Название принято Международным подкомитетом по таксономии в 1967 г. В России Y. enterocolitica впервые была выделена М.А.Беловой, Г.В.Ющенко (1968). Этиологическая роль Y. enterocolitica аргументирована при возникновении илеитов, энтеритов и гастроэнтеритов, мезентериальных лимфаденитов, заболеваний печени и мочевыводяших путей, аппендицитов, других внекишечных проявлений (форм) иерсиниоза.

3.1.1. Биологические характеристики иерсиний

Морфологические свойства

Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis - грамотрицательные палочки с закругленными концами, диаметром 0,5-0,8 и длиной 1-3 мкм. Размеры палочек колеблются в зависимости от возраста культуры, температуры и среды выращивания. Микроорганизмы окрашиваются всеми анилиновыми красителями. В мазках имеют вид палочек, а из бульонных культур и отпечатков органов экспериментально зараженных животных - коккобактерии с биполярной окраской. В мазках из жидких питательных сред Y. pseudotuberculosis могут располагаться цепочками, что не наблюдается у Y. enterocolitica.

Культуральные свойства

Возбудители псевдотуберкулеза и иерсиниоза - факультативные анаэробы. Оптимальная температура их культивирования - 22-28 °С, но они могут размножаться при температуре от 2 до 40 °С, в том числе при 2-10 °С, что дало основание J.S.Peterson и R.A.Cook (1963) предложить метод выделения культуры после выдерживания посевов на холоде (4-6 °С) в фосфатном буфере (так называемое холодовое обогащение). При более высокой температуре культивирования иерсинии обоих видов неподвижны. Y. pseudotuberculosis имеет 3-5 жгутиков, расположенных перитрихиально или полярно, а Y. enterocolitica - множество расположенных перитрихиально. Благодаря жгутикам бактерии подвижны. При температуре выше 30 °С жгутики не активны, а также культуры слабо и/или не активны в серологических реакциях.

Иерсинии неприхотливы и не требовательны к питательным веществам; растут на обычных питательных средах (МПА, агары Хоттингера и Мартена, Эндо и др.). Оптимальной для роста является рН среды 7,2-7,4; хотя иерсинии могут расти при рН от 5,2 до 9,0. Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica способны размножаться на минимальной среде без добавлении аминокислот, что позволяет отнести их к прототрофам.

На плотных средах при температуре 22-28 °С через сутки иерсинии вырастают в виде мелких, выпуклых, полупрозрачных, бесцветных колоний с ровным или волнистым краем. При температуре 37 °С колонии становятся прозрачными и имеют неровные фестончатые края и выпуклый центр. Оба микроорганизма хорошо растут на средах Мак-Конки и дезоксихолатном агаре.

     Как правило, Y. pseudotuberculosis, выделенные от больных и грызунов, находятся в S-форме при росте на плотной питательной среде, хорошо эмульгируются в физиологическом растворе, полупрозрачные, с ровным краем. При посеве старых, хранившихся в лабораторных условиях, культур и иногда при выделении Y. pseudotuberculosis из объектов окружающей среды бактерии растут в виде колоний с выпуклым, бугристым, коричневым центром и тонкой прозрачной "кружевной" периферической зоной (R-форма), имеющих сходство с колониями Y. pestis.

Полиморфизм колоний Y. enterocolitica менее выражен. Однако в условиях культивирования при 37 °С Y. enterocolitica диссоциируют на S-R варианты, колонии не прозрачны, имеют неровный фестончатый край, выпуклый, сферический, иногда бугристый или исчерченный центр. В жидкой питательной среде такие культуры растут в виде хлопьевидного осадка на дне, оставляя бульон прозрачным, а гладкие - равномерно мутят среду. Такой рост в жидкой среде характерен больше для Y. pseudotuberculosis. При росте Y. enterocolitica бульон не бывает прозрачным. Диссоциированные культуры слабо и/или не активны в серологических реакциях.

Биохимические свойства

В табл.1 представлены биохимические свойства, дифференцирующие Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica.

Таблица 1

Основные биохимические свойства бактерий рода Yersinia, отличающие их от представителей семейства Enterobacteriaceae