4.1 Общие положения
Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696 или бидистиллированную воду.
4.2 Реактивы и растворы
4.2.1 Метанол чистотой не менее 99,8%.
4.2.2 Натрий уксуснокислый трехводный чистотой не менее 99%.
4.2.3 Натрий уксуснокислый, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм.
4.2.4 Натрий уксуснокислый, раствор молярной концентрации 2,5 моль/дм.
4.2.5 Кислота уксусная ледяная чистотой не менее 99,8%.
4.2.6 Кислота уксусная, раствор молярной концентрации 0,02 моль/дм.
4.2.7 Кислота соляная массовой долей 35%.
4.2.8 Кислота соляная, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм.
4.2.9 Кислота соляная, раствор молярной концентрации 0,01 моль/дм.
4.2.10 Кислота серная, раствор молярной концентрации 0,05 моль/дм.
4.2.11 Натрия гидроокись чистотой не менее 99%.
4.2.12 Натрия гидроокись, раствор молярной концентрации 0,5 моль/дм.
4.2.13 Фосфора пентоксид чистотой не менее 98%.
4.2.14 Дефосфорилирующий фермент, пригодный для гидролиза связанного рибофлавина в пробе.
Примечание - При установлении характеристик прецизионности методики использована така-диастаза*.
_______________
* Така-диастаза N Т00040 - торговое наименование изделия, выпускаемого Platz and Bauer, Waterbury, CT 06708, США. Данная информация приведена для удобства применения настоящего стандарта и не является рекламной поддержкой МГС данного изделия. Допускается использовать аналогичные изделия при условии обеспечения идентичных результатов.
4.2.15 Подвижные фазы для ВЭЖХ
Варианты подвижных фаз подходящего состава приведены в пояснении к рисунку A.1 приложения A и в приложении C. В качестве подвижных фаз используют смеси метанола (см. 4.2.1) с водой, фосфатным или ацетатным буферным раствором при объемной доле метанола от 10% до 50%, а также подвижные фазы с добавлением ион-парных реагентов.
4.2.16 Раствор буферный фосфатный (3,5) молярной концентрации однозамещенного фосфата калия 9,0 ммоль/дм.
4.2.17 Тетраэтиламмония хлорид чистотой не менее 98%.
4.2.18 Натрия гептансульфонат чистотой не менее 98%.
4.3 Образцы сравнения
4.3.1 Рибофлавин () чистотой не менее 98%
Рибофлавин выпускают многие производители, при этом его чистота может различаться. Это обусловливает необходимость определения концентрации градуировочного раствора рибофлавина спектрофотометрическим методом по 4.4.3.