Методические указания по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов

7. МИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

Микологическое исследование входит в комплекс санитарно-микологического контроля кормов и ставит своей целью выявление токсигенных или патогенных грибов, развивающихся в период вегетации и хранения кормов.

7.1. Выявление фитопатогенных грибов, развивающихся только в период вегетации злаков.

Санитарно-показательными фитопатогенными грибами являются спорынья и головневые грибы.

Спорынья (Claviceps purpurea) поражает культурные и дикорастущие злаки в период вегетации, при этом на зараженных колосьях ко времени созревания вместо зерен образуются буро-фиолетовые склероции ("рожки") длиной до 15 мм. При скармливании животным кормов, содержащих такие склероции (в грубых кормах, зерне) или их частицы (в комбикормах, продуктах переработки зерна), может возникнуть отравление - эрготизм.

Головня - заболевание злаковых растений, вызываемое головневыми грибами (Ustilaginales). В зерновом фураже головня может обнаруживаться как в виде пораженных зерен (мешочков) или их обломков, так и в виде распыленных спор (хламидоспор), приставших к оболочке зерна ("синегузочное" и "мараное" зерно).

7.1.1. Определение содержания головневых мешочков в зерне.

Пораженные зерна (мешочки) вручную отделяют из навески зерна в 400 г, взвешивают на технохимических весах с точностью до 0,01 г и определяют их процентное содержание.

7.1.2. Определение содержания спор головневых грибов в зерне (ГОСТ 13496.11-74).

Сущность метода заключается в отмывании спор головни от зерна, последующем осаждении их на бумажном фильтре фильтрованием под вакуумом, взвешивании и вычислении их процентного содержания.

7.1.2.1. Подготовка прибора для фильтрации. Фильтрацию проводят с помощью модифицированного прибора Зейтца (схема прибора приведена в ГОСТ 13496.11-74).

В нижнюю треть цилиндрической части прибора Зейтца вставляют кольцо, изготовленное из стальной проволоки диаметром 1-2 мм; на кольцо помещают металлическую сетку с величиной ячеек 2-4 мм, а на сетку - два кружка из полотна сита N 0105. Размер кольца, сетки и кружков из полотна сита должен соответствовать внутреннему диаметру цилиндрической части прибора.

Кружок, вырезанный из фильтра "синяя лента", диаметром на 0,3 см, превышающим внешний диаметр прибора Зейтца, обезжиривают в диэтиловом эфире в течение 20-30 мин и, после высушивания, взвешивают на аналитических весах с точностью до 0,001 г.

Фильтр помещают в разъемную часть прибора на резиновую прокладку по размеру внешнего диаметра прибора, которую предварительно 2-3 часа выдерживают в эфире. Под резиновую прокладку помещают металлическую сетку, приложенную к прибору, затем винтами соединяют цилиндрическую и конусовидную части прибора.

Прибор Зейтца, собранный указанным способом, вставляют в отверстие пробки, которой закрыта колба Бунзена. Колбу Бунзена соединяют шлангом с водоструйным насосом или с вакуум-насосом Камовского.

7.1.2.2. Ход определения. Навеску исследуемого зерна массой 50 г, взвешенную на технохимических весах, помещают в коническую колбу вместимостью 250 мл, заливают 100 мл диэтилового эфира, взбалтывают в течение одной минуты, дают отстояться в течение 10-20 секунд для осаждения частиц почвы, после чего жидкость сливают в прибор Зейтца. Такую промывку зерна проводят до получения бесцветной жидкости в колбе с навеской зерна.

После окончания фильтрации прибор разбирают, извлекают фильтр, выдерживают 5 минут в вытяжном шкафу и взвешивают на аналитических весах до тысячных долей грамма.

7.1.2.3. Подсчет содержания спор головневых грибов. Содержание спор головневых грибов в процентах вычисляют по формуле:

,

где: - масса фильтра после фильтрации, г;

- масса фильтра до фильтрации, г.

Допускаемые расхождения между результатами контрольных испытаний не должны превышать 0,01%.

7.1.3. Определение содержания спор головневых грибов в комбикормах и продуктах переработки зерна (ГОСТ 13496.10-74).

Сущность метода заключается в подсчете количества спор головневых грибов с помощью счетной камеры Горяева.

7.1.3.1. Подготовка к испытанию. Средний образец комбикорма массой 1 кг размалывают на лабораторной мельнице до прохождения через сито с диаметром отверстий 1 мм. Указанного измельчения достигают просеиванием и дополнительным измельчением остатка комбикорма на сите до тех пор, пока вся взятая масса комбикорма не будет измельчена до указанной степени размола. После измельчения образец тщательно перемешивают. После этого 10 г измельченного корма помещают в фарфоровую ступку и высушивают в сушильном шкафу при 100 °С в течение 15 мин, после чего навеску тщательно растирают в фарфоровой ступке, периодически (3-5 раз) добавляя по 3 мл диэтилового эфира для равномерного распределения спор.

Для установления равномерности распределения спор гриба в навеске готовят препарат для микроскопирования. С этой целью в каплю воды на предметное стекло с помощью препаровальной иглы, смоченной в воде, помещают небольшое количество корма, растертого в диэтиловом эфире, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом. В хорошо растертой навеске не должно содержаться склеенных в кучки спор. На одном стекле готовят одновременно два препарата.

0,1 г комбикорма, растертого в эфире, помещают в пробирку, приливают 10 мл 0,5%-ного раствора едкого кали, взбалтывают, нагревают над пламенем горелки до кипения и охлаждают.

7.1.3.2. Ход определения. После тщательного перемешивания тонко оттянутой пастеровской пипеткой сразу же берут небольшое количество содержимого пробирки и вносят его в счетную камеру Горяева.

Просмотр и подсчет спор производят с помощью микроскопа при хорошем освещении и увеличении 200-300. Считают количество спор на всей сетке камеры, площадь которой равна 9 мм. При наличии половинок спор каждые две половинки считают за одну целую спору.

Споры грибов хорошо различимы под микроскопом, одноклеточные, шаровидные, но могут быть продолговатыми, эллиптическими или неправильной формы. Цвет спор - желтоватый, коричневатый, оливковый. Оболочка гладкая либо бородавчатая, щетинистая, сетчато-утолщенная (чертеж спор головневых грибов приведен в ГОСТ 13496.10-74).