Методические указания по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов

6. ТОКСИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

6.1. Определение токсичности кормов методом пробы на коже кролика (ГОСТ 13496.7-71*).

________________

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52337-2005. - Примечание изготовителя базы данных.

Методика предназначена для определения токсичности фуражного зерна, продуктов его переработки, комбикормов и других видов концентрированных кормов (за исключением жмыхов, шротов и кормовых дрожжей), а также грубых кормов. Метод основан на дермонекротическом действии токсических веществ микогенного происхождения, извлекаемых из корма диэтиловым эфиром или ацетоном.

6.1.1. Получение экстракта. В банку или колбу с притертой пробкой вместимостью 500 см помещают 50 г измельченного корма, заливают 150 мл диэтилового эфира, или эфира для наркоза или ацетоном, экстрагируют 24 часа при комнатной температуре, периодически встряхивая вручную или на шуттель-аппарате в течение 3 часов. Если слой экстрагента над навеской будет менее 1 см, объем его увеличивают.

Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в выпарительную чашку. Оставшуюся в колбе или банке навеску корма дополнительно промывают небольшим количеством эфира (не менее 20 мл), промывную порцию фильтруют через тот же фильтр. Эфир выпаривают до полного исчезновения запаха. Для ускорения процесса можно использовать водяную баню. Экстракт, оставшийся на стенках чашки, смывают эфиром с тем, чтобы основное количество его находилось на дне чашки. Все операции, связанные с использованием эфира, проводят в вытяжном шкафу.

6.1.2. Проведение испытания. У кролика массой 2-2,5 кг в области бедра, лопатки или бока в день постановки биопробы тщательно выстригают участок кожи размером 6х6 см. Пигментированная кожа, а также кожа с признаками шелушения непригодна для проведения испытаний. На одном кролике допускается ставить одновременно не более 4 проб.

На выстриженный участок кожи кролика стеклянной лопаткой наносят, слегка втирая, половину экстракта. В случае если он имеет восковидную консистенцию, его предварительно подогревают. Небольшую часть участка оставляют свободной от экстракта как контрольную.

Через 24 часа наносят оставшуюся часть экстракта. Если экстракта недостаточно для двух нанесений, его предварительно разбавляют подсолнечным маслом с тем расчетом, чтобы общее количество его составляло не менее 1 грамма.

Для предупреждения слизывания экстракта, нанесенного на кожу, на шею кролика надевают воротник, который снимают не ранее чем через 3 дня. Учет реакции ведут на следующий день после повторного нанесения экстракта и продолжают в течение 3-5 дней в зависимости от развития реакции.

6.1.3. Оценка результатов исследования.

Корм нетоксичный - отсутствие воспалительной реакции, или наличие гиперемии, сохраняющейся не более двух суток после нанесения экстракта и не сопровождающейся шелушением кожи.

Корм слаботоксичный - гиперемия, сохраняющаяся 2-3 суток и заканчивающаяся шелушением кожи, или гиперемия, болезненность и отечность, проявляющаяся незначительным утолщением кожи с последующим образованием отдельных корочек.

Корм токсичный - резкая гиперемия, болезненность, складчатость, отек, проявляющийся сильным утолщением кожи, на всей поверхности участка появляются язвы, затем сплошной струп.

6.2. В качестве дополнительного может быть использован метод определения токсичности кормов на рыбах-гуппи, позволяющий обнаруживать микотоксины трихотеценовой группы, стеригматоцистин, патулин (Приложение 5, п.3).

6.3. Токсичность жмыхов, шротов и кормовых дрожжей определяют на белых мышах (Приложение 6).

6.4. В случае, когда указанными выше методами не выявляется токсичность корма при наличии отравлений в хозяйствах, токсичность можно установить методом скармливания одному из видов лабораторных животных: цыплятам, утятам, голубям, белым мышам, морским свинкам, кроликам. Для определения токсичности концентрированных или комбинированных кормов используют цыплят в возрасте 10-15 дней, утят в 10-дневном возрасте, молодых мышей весом 20-25 г, а при определении токсичности грубых кормов - молодых морских свинок и кроликов.

Подозрительный по качеству корм вводят в суточный рацион взамен аналогичного доброкачественного корма в количествах, определенных зоотехническими нормами для данного вида животных.

Скармливание проводят не менее 10 дней подряд. Токсикоз проявляется быстрее, если пораженный корм скармливать подопытным животным на голодный желудок, для чего перед опытом их выдерживают 5-6 часов без корма (дачу воды не ограничивают). Для опыта берут 5 животных, за ними ведут ежедневные клинические наблюдения, учитывают поедаемость корма.

Показателями токсичности кормов при постановке биопробы являются: потеря в весе, расстройства желудочно-кишечного тракта и центральной нервной системы (дрожь, угнетение или возбуждение, нарушение координации движения, судороги, параличи); у цыплят и утят - цианоз гребня и сережек, сонливость, нередко понос, развитие анемии, судороги, параличи; у голубей - рвота.

Токсичные корма могут вызывать гибель подопытных животных без проявления клинических признаков.

Если после скармливания исследуемого корма в сроки наблюдения (10 дней) гибель подопытных животных не наступает, то их убивают и вскрывают. При вскрытии павших и убитых животных обнаруживают катаральное воспаление желудочно-кишечного тракта, иногда кровоизлияния, а также дегенеративные изменения паренхиматозных органов. Для птиц характерен гепатит различной интенсивности (цвет печени оранжевый, желтый и др.) в зависимости от степени токсичности корма.

6.5. В случаях, если токсичность корма не выявлена выше перечисленными методами, для установления роли кормов в возникновении заболеваний невыясненной этиологии применяют скармливание подозрительных кормов тем видам животных, которые болели в хозяйстве.

При постановке биопробы непосредственно в хозяйстве подопытным животным (3-5 голов) скармливают подозрительные корма в количестве, предусмотренном суточным рационом для данного вида животного. Корма дают без перерыва в течение 10 дней. За подопытными животными ведут ежедневные клинические наблюдения и учитывают: температуру, пульс, дыхание, деятельность желудочно-кишечного тракта, состояние слизистых оболочек, особенно ротовой полости, общее поведение животных. Одновременно ведут учет количества съеденного корма.

Положительными показателями биопробы являются: потеря в весе, расстройства желудочно-кишечного тракта (понос, запор, атония с тимпанией или без нее), усиление саливации, скрежетание зубами, стоматит, рвота у свиней, пониженный аппетит (может быть нормальный), нарушение координации движений, дрожь, угнетение, аборты, температура может быть нормальной или пониженной.