ГОСТ 32293-2013 Методы испытаний химической продукции, представляющей опасность для окружающей среды. Испытание водорослей и цианобактерий на задержку роста (Переиздание)

     11 Проведение тестирования

    11.1 Подготовка прививочной культуры

11.1.1 Для адаптации исследуемых водорослей к условиям тестирования и гарантии того, что водоросли находятся в фазе экспоненциального роста при прививании тестируемых растворов, прививочная культура в питательной среде готовится за 2-4 дня до начала тестирования.

11.1.2 Водорослевая биомасса должна быть приспособлена к условиям тестирования так, чтобы экспоненциальный рост преобладал в прививочном материале до начала тестирования.

11.1.3 Прививочную культуру выдерживают при тех же условиях, что и тестируемые виды. Измеряют увеличение биомассы в прививочной культуре для проверки того, что скорость роста находится в пределах нормального диапазона для тестируемого вида в условиях культивирования. Пример процедуры культивирования морских водорослей описан в приложении С. Для того чтобы избежать синхронного деления клеток во время тестирования, может потребоваться второй этап культивирования прививочной культуры.

    11.2 Подготовка тестируемых растворов

11.2.1 Все тестируемые растворы должны содержать одинаковое количество питательной среды и начальной биомассы. Тестируемые растворы с выбранными концентрациями обычно готовятся путем перемешивания основного исследуемого вещества с питательной средой и прививочной культурой. Основные растворы обычно готовятся путем растворения исследуемого вещества в питательной среде.

11.2.2 Растворители, например ацетон, трет-бутиловый спирт и диметилформамид, могут использоваться в качестве носителей для добавления плохо растворимых веществ к питательной среде. Концентрация растворителя не должна превышать 100 мл/л, такая же концентрация растворителя должна быть добавлена ко всем пробам, включая контрольные пробы.

    11.3 Инкубация

11.3.1 Тестовые сосуды укупоривают водонепроницаемыми заглушками. Тестовые сосуды встряхивают и помещают в аппарат для культивирования. Во время тестирования необходимо поддерживать суспензию водорослей и стимулировать перенос углекислого газа () за счет непрерывного встряхивания сосудов. Температуру тестовых сосудов необходимо поддерживать в диапазоне от 21 до 24±2°С.

11.3.2 Для культивирования видов, отличных от перечисленных в приложении А, например тропических видов, могут быть необходимы более высокие температуры при условии, что выполняются критерии достоверности тестирования.

11.3.3 Рекомендуется помещать тестовые сосуды в инкубатор в случайном порядке и ежедневно перемещать их.

11.3.4 Значение рН контрольной пробы во время тестирования не должно увеличиваться более чем на 1,5 единицы. Для металлов и соединений, которые частично ионизируются при рН в диапазоне тестового значения рН, необходимо ограничить отклонения значений рН, чтобы получить воспроизводимые и четкие результаты. Отклонение рН<0,5 может быть технически обеспечено и достигается путем установления соответствующего уровня переноса углекислого газа () из окружающего воздуха к тестируемому раствору, например за счет увеличения скорости перемешивания или снижения потребления углекислого газа () путем сокращения начальной биомассы или продолжительности тестирования.

11.3.5 Поверхность, на которой выдерживаются тестовые сосуды, должна получать непрерывное, однородное флуоресцентное освещение, например "холодный" белый или дневной свет.

Штаммы водорослей и (или) цианобактерий требуют различных условий освещенности.

Интенсивность света должна быть подобрана с учетом тестируемых видов.

Примеры

1 Для рекомендуемых видов зеленых водорослей выбирают интенсивность света на уровне тестируемых растворов в диапазоне от 60 до 120 мкЕ·м·с в фотосинтетически эффективном диапазоне длин волн 400-700 нм при измерении с использованием соответствующего рецептора.

2 Anabaena flos-aquae хорошо растут при более низкой интенсивности света и могут быть повреждены при высокой интенсивности света. Для таких видов должна быть подобрана средняя интенсивность света в диапазоне от 40 до 60 мкЕ·м·с. Для измерительных приборов, откалиброванных в люксах, эквивалентный диапазон от 4440 до 8880 люксов для "холодного" белого света приблизительно соответствует рекомендуемой интенсивности света в диапазоне от 60 до 120 мкЕ·м·с.

Интенсивность света поддерживают в пределах ±15% от средней интенсивности света в зоне инкубации.

11.4 Продолжительность тестирования

Продолжительность тестирования обычно составляет 72 ч. Она может быть уменьшена или увеличена при условии, что все критерии достоверности выполняются.

    11.5 Измерения и аналитические определения

11.5.1 Водорослевая биомасса в каждом тестовом сосуде измеряется как минимум ежедневно.