ГОСТ 32293-2013 Методы испытаний химической продукции, представляющей опасность для окружающей среды. Испытание водорослей и цианобактерий на задержку роста (Переиздание)

     10 Описание тестирования

10.1 Оборудование

10.1.1 При тестировании используются сосуды, изготовленные из стекла или другого химически инертного материала. Оборудование необходимо тщательно промыть. Никакие органические или неорганические загрязнители не должны влиять на рост водорослей и (или) цианобактерий или на состав питательной среды.

10.1.2 В качестве тестовых сосудов, как правило, используются стеклянные колбы объемом, достаточным для проведения измерений и обеспечивающим необходимый массовый перенос углекислого газа () из атмосферы. Объем жидкости должен быть достаточным для аналитических определений.

10.1.3 Может потребоваться:

- аппарат для культивирования: рекомендуется использовать емкости, в которых может поддерживаться выбранная температура инкубации ±2°С;

- оборудование для измерения освещенности: метод измерения интенсивности света, и в частности тип рецептора (коллектора), может оказать существенное влияние на измеряемую величину. Рекомендуется проводить измерения с использованием сферического 4 рецептора, который реагирует на прямой или отраженный свет от всех углов выше и ниже уровня измерения, или 2 рецептора, который реагирует на свет от всех углов выше уровня измерения;

- оборудование для измерения водорослевой биомассы: количество клеток водорослей является наиболее часто используемым показателем-заменителем биомассы. Подсчет клеток проводится с использованием электронного счетчика частиц или микроскопа.

Другие показатели-заменители могут быть измерены с помощью проточного цитометра, флуориметра, спектрофотометра или колориметра. Необходимо вычислить коэффициент перевода количества клеток в сухой вес биомассы. Для проведения значимых измерений для низких концентраций биомассы с помощью спектрофотометра необходимо использовать кюветы со световым путем 4 см.

10.2 Выбор видов

10.2.1 Возможно использование нескольких видов неприкрепленных водорослей и (или) цианобактерий. Водорослевые штаммы, подходящие для проведения тестирования, перечислены в приложении А.

10.2.2 Если используются другие виды водорослей и (или) цианобактерий, то в отчете о проведении тестирования необходимо указать штаммы и (или) их происхождение. Необходимо убедиться в том, что экспоненциальный рост выбранного вида водорослей может поддерживаться на протяжении всего тестирования при преобладающих условиях.

10.3 Питательная среда

10.3.1 При проведении тестирования рекомендуется использовать две аналогичные питательные среды - ААР и OECD. Составы питательных сред приведены в приложении В.

Начальное значение рН и буферная емкость (регулирующая увеличение рН) у данных сред различны.

Результаты тестирования могут отличаться в зависимости от используемой питательной среды, особенно при тестировании диссоциирующих веществ.

10.3.2 Модификация питательной среды может быть необходима при исследовании металлов и комплексообразующих веществ, а также при исследовании различных значений рН.

Использование модифицированной среды должно быть обосновано в отчете о проведении тестирования.

    10.4 Начальная концентрация биомассы

Количество биомассы в начале тестирования должно быть одинаковым для всех тестируемых видов и достаточно низким для того, чтобы наблюдался экспоненциальный рост в течение инкубационного периода без риска питательного истощения. Начальное количество биомассы не должно превышать 0,5 мг/л в пересчете на сухой вес. Рекомендуется использовать следующее начальное количество биомассы:

- Pseudokirchneriella subcapitata: 510-10 клеток/мл;

- Desmodesmus subspicatus: 2-510 клеток/мл;

- Navicula pelliculosa: 10 клеток/мл;

- Anabaena flos-aquae: 10 клеток/мл;

- Synechococcus leopoliensis: 510-10 клеток/мл.

    10.5 Концентрации исследуемого вещества

Диапазон концентраций, в котором, вероятно, будет наблюдаться воздействие, может быть определен на основе результатов исследования по подбору диапазона концентраций. Для заключительного определяющего исследования необходимо выбрать по крайней мере, пять концентраций, составляющих геометрическую прогрессию со знаменателем, не превышающим 3,2. Для исследуемых веществ, показывающих пологие кривые отклика, может быть выбран более высокий коэффициент. Необходимо, чтобы тестируемые концентрации находились в диапазоне, вызывающем ингибирование скорости роста водорослей в диапазоне от 5 до 75%.

10.6 Параллельные и контрольные пробы

10.6.1 Предусмотрено использование трех параллельных проб для каждой тестируемой концентрации. Если не требуется определять NOEC, то количество тестируемых концентраций может быть увеличено, а количество параллельных проб для каждой концентрации уменьшено. Количество контрольных проб должно в два раза превышать количество параллельных проб для каждой тестируемой концентрации.

10.6.2 Отдельный набор тестируемых растворов готовят для аналитического определения концентраций исследуемого вещества.