ГОСТ 32293-2013

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ, ПРЕДСТАВЛЯЮЩЕЙ ОПАСНОСТЬ ДЛЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Испытание водорослей и цианобактерий на задержку роста

Testing of chemicals of environmental hazard Alga and Cyanobacteria, Growth Inhibition Test

МКС 71.040.50

Дата введения 2014-08-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 5 ноября 2013 г. N 61-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 777-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32293-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 августа 2014 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту OECD Test No. 201:2011 Испытание водорослей на задержку роста ("Alga, Growth Inhibition Test", IDT)

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.      

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Декабрь 2019 г.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения воздействия исследуемого вещества на рост водорослей и (или) цианобактерий.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ISО 14442:2006 Water quality - Guidelines for algal growth inhibition tests with poorly soluble materials, volatile compounds, metals and waste water (Качество воды. Руководящие указания по испытанию на торможение малорастворимыми веществами, летучими соединениями, металлами и сточными водами роста водорослей)

ISО 5667-16:1998* Water quality - Sampling - Part 16: Guidance on biotesting of samples (Качество воды. Отбор проб. Часть 16. Руководство по биотестированию проб)

________________

* Заменен на ISO 5667-16:2017.

ISО 8692:2012 Water quality - Fresh water algal growth inhibition test with unicellular green algae (Качество воды. Испытание на подавление роста водорослей в пресной воде с использованием одноклеточных зеленых водорослей)

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины с соответствующими определениями:

3.1 биомасса (Biomass): Сухая масса живого материала, присутствующего в популяции, выраженная по отношению к данному объему, например, мг водорослей на 1 л тестируемого раствора. В стандарте используются показатели - заменители биомассы, такие, как количество клеток, флюоресценция и т.д. Использование термина "биомасса" также относится и к показателям-заменителям.

3.2 наименьшая наблюдаемая эффективная концентрация (Lowest Observed Effect Concentration - LOEC): Минимальная концентрация исследуемого вещества, при которой наблюдается статистически значимое уменьшение роста водорослей и (или) цианобактерий (при р<0,05) по сравнению с контрольной группой в пределах установленного периода экспозиции. Все тестируемые концентрации, превышающие LOEC, должны иметь токсический эффект, равный или больше наблюдаемого при LOEC. Если данные условия не соблюдаются, то должно быть приведено достаточное обоснование того, как может быть выбрана LOEC.

3.3 неэффективная наблюдаемая концентрация (No Observed Effect Concentration - NOEC): Концентрация исследуемого вещества, находящаяся сразу под LOEC, которая не оказывает никакого статистически значимого воздействия на рост тестируемой группы водорослей и (или) цианобактерий по сравнению с контрольной группой в пределах установленного периода экспозиции.

3.4 коэффициент изменчивости (КИ) (Coefficient of variation): Безразмерная величина изменчивости показателя, определяемая как отношение стандартного отклонения к среднему. Данный коэффициент также может быть выражен в процентах. Средний коэффициент изменчивости средней специфической скорости роста водорослей и (или) цианобактерий в параллельных контрольных тестах вычисляют как среднее значение коэффициента изменчивости средней специфической скорости роста водорослей и (или) цианобактерий для суток или группы в соответствующем параллельном контрольном тесте.

3.5 : Концентрация исследуемого вещества, которая приводит к х%-ному (например, 50%-ному) сокращению роста водорослей и (или) цианобактерий в течение установленного периода воздействия (период воздействия должен быть указан отдельно, если он отличается от стандартного или полного периода тестирования). Для однозначного обозначения величины ЕС, полученной из скорости роста, используется обозначение , из прироста - обозначение .

3.6 переменная отклика (Response variable): Переменная для оценки токсичности, полученная на основании любых измеряемых параметров описания биомассы с помощью различных расчетных методов. Для данного тестирования скорость роста и прирост являются переменными отклика, полученными при измерении непосредственно биомассы или любого из показателей-заменителей.

3.7 питательная среда (Growth medium): Синтетическая питательная среда, в которой развиваются тестируемые водоросли и (или) цианобактерии. Как правило, исследуемое вещество растворяют в питательной среде.

3.8 прирост (Yield): Измеренная величина переменной в конце тестирования за минусом измеренной величины переменной в начале тестирования, используемая для выражения увеличения биомассы во время тестирования.

3.9 скорость роста (средняя специфическая скорость роста) (Growth rate): Логарифмическое увеличение биомассы во время воздействия исследуемого вещества.

3.10 специфическая скорость роста (Specific growth rate): Переменная отклика, определяемая как соотношение разности натуральных логарифмов параметра наблюдения (биомассы) и соответствующего периода.

     4 Общие сведения

Тестирование позволяет оценить воздействие более чем на несколько поколений водорослей и (или) цианобактерий.

Экспоненциально растущие водоросли и (или) цианобактерии подвергаются воздействию исследуемого вещества в течение 72 ч.

Отклик водорослей и (или) цианобактерий заключается в сокращении их роста при воздействии различных концентраций исследуемого вещества.

Отклик оценивают как функцию концентрации исследуемого вещества по сравнению со средним ростом водорослей и (или) цианобактерий в параллельных, не подверженных воздействию исследуемого вещества, контрольных пробах.

Для полного выражения системного отклика на токсическое воздействие (оптимальной чувствительности) водоросли и (или) цианобактерии неограниченно экспоненциально растут при соблюдении соответствующих питательных условий и параметров освещения в течение определенного периода, достаточного для измерения снижения специфической скорости роста.

     5 Принцип тестирования

5.1 Рост и ингибирование роста водорослей и (или) цианобактерий могут быть определены количественно на основании измерений водорослевой биомассы в зависимости от времени.

Водорослевую биомассу определяют как сухую массу водорослей на 1 л тестируемого раствора.

Поскольку сухую массу трудно измерить, используют показатели - заменители биомассы, например количество клеток (объем клеток, флюоресценция, оптическая плотность).

5.2 Результатом тестирования является ингибирование роста, выраженное как логарифмическое увеличение биомассы (средней специфической скорости роста) в течение периода воздействия.

Из средних специфических скоростей роста, зарегистрированных в серии тестируемых растворов, концентрация, вызывающая определенное х%-ное ингибирование роста (например, 50%-ное) определяется и выражается как (например, ).

5.3 В качестве дополнительного параметра отклика рекомендуется использовать прирост, который определяется как изменение биомассы в конце тестирования по отношению к ее значению в начале тестирования. От прироста, зарегистрированного в серии тестируемых растворов, концентрация, вызывающая определенное х%-ное ингибирование роста (например, 50%-ное), определяется и выражается как (например, ).

5.4 В результате тестирования могут быть определены наименьшая наблюдаемая эффективная концентрация (LOEC) и неэффективная наблюдаемая концентрация (NOEC).

     6 Информация об исследуемом веществе

6.1 Информация об исследуемом веществе должна содержать сведения о растворимости исследуемого вещества в воде, коэффициенте распределения н-октанол - вода и давлении пара. Количественное определение исследуемого вещества в тестируемых растворах необходимо проводить с помощью достоверного аналитического метода с известной точностью и пределом обнаружения.

6.2 Полезной может быть также информация:

- о структурной формуле исследуемого вещества;

- о чистоте исследуемого вещества;

- об устойчивости на свету;

- о стабильности в условиях тестирования;

- о способности поглощать свет;

- о константе диссоциации ;

- о способности к трансформациям в окружающей среде, включая результат тестирования на потенциальную способность исследуемого вещества к биоразложению.

     7 Достоверность тестирования

Устанавливаются следующие критерии достоверности:

- биомасса в контрольных пробах должна увеличиваться экспоненциально с минимальным коэффициентом 16 в течение 72 ч, что соответствует специфической скорости роста, равной 0,92 за 24 ч (день). Для часто используемых видов водорослей скорость роста существенно выше (приложение А). Данный критерий может не устанавливаться, если используются виды, растущие медленнее, чем виды, указанные в приложении А. В таком случае период тестирования должен быть продлен для того, чтобы получить 16-кратный рост контрольной группы водорослей и (или) цианобактерий. В то же время рост контрольной группы водорослей и (или) цианобактерий должен быть экспоненциальным в течение тестирования. Период тестирования может быть сокращен до 48 ч для поддержания неограниченного экспоненциального роста контрольной группы водорослей и (или) цианобактерий до тех пор, пока коэффициент роста не достигнет 16;

- средний коэффициент изменчивости для специфической скорости роста (дни 0-1, 1-2 и 2-3-й для 72 ч) в контрольных группах не должен превышать 35%. Данный критерий относится к средним значениям КИ, вычисленным в параллельных контрольных пробах;

- коэффициент изменчивости средней специфической скорости роста в параллельных контрольных пробах не должен превышать 7% при тестировании Pseudokirchneriella subcapitata и Desmodesmus subspicatus. Для остальных видов водорослей данная величина не должна превышать 10%.

     8 Стандартные вещества

Для оценки правильности проведения тестирования рекомендуется использовать стандартное вещество, например 3,5-дихлорфенол. Для зеленых водорослей в качестве стандартного вещества может быть использован дихромат калия. Необходимо проводить тестирование со стандартным веществом как минимум два раза в год.

     9 Применимость тестирования

Тестирование, как правило, проводят для растворимых в воде веществ. Для исследования летучих веществ, сильных адсорбентов, окрашенных веществ, имеющих низкую растворимость, или веществ, которые могут повлиять на доступность питательных веществ или минералов в питательной среде, могут понадобиться изменения процедуры тестирования (например, использование закрытой системы, кондиционирование тестовых сосудов) [1]-[3].