ГОСТ ИСО 21570-2009 Продукты пищевые. Методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и производных продуктов. Количественные методы, основанные на нуклеиновой кислоте

С.2 Метод специфической конструкции для количественного определения содержания сои линии GTS 40-3-2 с использованием ПЦР в реальном времени (метод 2)

С.2.1 Введение

В настоящем приложении описан метод специфической амплификации и обнаружения таксон-специфического гена сои (ген лектина, le1) и специфического участка генной конструкции - места соединения ДНК 35S-промотора вируса мозаики цветной капусты и хлоропластного сигнала Petunia hybrida, предшетствующего последовательности гена 5-енолпирувилшикимат-3-фосфат-синтазы Agrobacterium (epsps), присутствующего в ГМ-сое линии GTS 40-3-2 (Roundup Ready®) для количественного определения относительного количества ДНК, происходящей из ГМ-сои линии GTS 40-3-2.

_______________

Приведены примеры доступных коммерческих продуктов. Информация предоставлена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является подтверждением соответствия указанного продукта требованиям ISO. Допускается использование эквивалентных продуктов в случае, если доказано, что будут достигнуты аналогичные результаты.

Ограничения см. в С.2.8.

С.2.2 Статус подтверждения достоверности и характеристики рабочих параметров

С.2.2.1 Общие положения

Метод был оптимизирован для приборов для ПЦР в реальном времени с использованием СЭМ (СЭМ IRMM-410R) [18], состоящих из высушенной муки соевых бобов, включающих смеси сои линии GTS 40-3-2 и обычной сои.

_______________

Воспроизводимость и точность описанного метода были проверены в ходе межлабораторных испытаний с использованием неизвестных образцов, состоящих из вышеупомянутых эталонных материалов. Кроме того, были протестированы обработанные эталонные материалы текстурированного растительного белка (далее - ТРБ).

Число копий каждой из целевых последовательностей на геном подробно оценено не было.

С.2.2.2 Межлабораторные испытания

Шесть неизвестных образцов, содержащие от 0,1% до 5% (по массе) вышеупомянутых СЭМ (СЭМ IRMM-410R) и ТРБ, содержащего 2% (по массе) сои линии GTS 40-3-2, были проанализированы:

- 14 лабораториями, использовавшими СОП ABI PRISM® 7700;

- 6 лабораториями, использовавшими СОП ABI GeneAmp® 5700;

- 12 лабораториями, использовавшими систему LightCycler® (Roche Diagnostics).

_______________

Количество участников и образцов - в соответствии с ISO 5725.

Система специфической конструкции GTS 40-3-2 дала относительное стандартное отклонение воспроизводимости в диапазоне от 27% до 44% при использовании аппаратов СОП ABI PRISM® 7700 и СОП ABI GeneAmp® 5700 соответственно и в диапазоне от 27% до 64% при использовании Light-Cycler® (Roche Diagnostics).

_______________

Для экстракции ДНК использовалась процедура, приведенная в ISO 21571:2005, А.3.

Для каждого образца параллельно анализировались два экстракта ДНК. Каждый исследуемый образец был проанализирован трижды.

Точность метода, достоверность и предел количественного определения определялись в ходе межлабораторных испытаний. Данные специфичности, линейности и пределов обнаружения и количественного определения были установлены до межлабораторных испытаний. Содержание ДНК в исследуемых образцах охватывало эти величины.

Данные валидации достоверности и точности приведены в таблицах С.5 и С.6.

Таблица С.5 - Данные валидации для СОП ABI PRISM® 7700 и СОП ABI GeneAmp® 5700