Инокулят должен быть предварительно подготовлен к эксперименту, но не может быть предварительно адаптирован к исследуемому веществу. Предварительная подготовка заключается в аэрации (в питательной среде) активного ила или воды вторичных отстойников в течение 5-7 дней при температуре проведения испытания. В некоторых случаях предварительная подготовка увеличивает точность методов испытаний, уменьшая количество холостых результатов. Подобная подготовка не является необходимой для посевной культуры для метода MITI (метод С).