Метод, используемый для внесения тестируемого и референтного веществ к реакционной смеси, зависит от природы химического вещества, особенно от его растворимости в воде. Для веществ, обладающих растворимостью более 1 г/л, готовят основные растворы соответствующих концентраций и используют их аликвоты для подготовки окончательного экспериментального раствора. Плохо растворимые (растворимость менее 1 г/л) вещества необходимо растворять в минеральной среде, чтобы избежать разбавления буферного раствора. Еще менее растворимые вещества необходимо добавлять непосредственно к окончательному раствору питательной среды.
Исследование слаборастворимых и нерастворимых веществ проводят по приложению Б, но в методе MITI (метод С) не следует использовать ни органические растворители, ни эмульгаторы.