3.1.1 Раствор или суспензия исследуемого вещества в минеральной питательной среде высевается и инкубируется в аэробных условиях в темноте или при рассеянном свете. Количество РОУ в исследуемом растворе, получаемое от посевного материала (инокулята), должно сохраняться на минимально возможном уровне, по сравнению с количеством органического углерода тестируемого вещества.
3.1.2 Для определения поправки на эндогенные эффекты инокулята могут быть проведены параллельные контрольные эксперименты с посевным материалом, но без внесения исследуемого вещества. Следует учитывать, что эндогенная активность клеток в присутствии химического вещества не будет точно и полностью соответствовать эндогенной активности в контрольном эксперименте. Для проверки воспроизводимости эксперимента параллельно ставится референтная (стандартная) смесь.
3.1.3 В общем случае биоразлагаемость сопровождается определением таких параметров, как РОУ, выделение и потребление кислорода. Для определения начала и окончания биологического распада необходимо проводить измерения в достаточно частых интервалах. При использовании автоматических респирометров измерение осуществляется непрерывно. В некоторых случаях измерения РОУ проводятся в дополнение к каким-либо другим параметрам, но обычно это делается только в начале и в конце эксперимента. Также для оценки основной деградации исследуемого вещества и определения концентрации каких-либо промежуточных продуктов может использоваться специфический химический анализ. Это условие является обязательным в методе MITI (метод С).
3.1.4 В общем случае эксперимент длится в течение 28 дней, однако он может быть завершен и раньше (до истечения 28 дней), то есть, как только кривая биоразложения выйдет на плато как минимум для трех определений. Также эксперимент может быть продлен по истечении 28 дней, когда кривая показывает, что биологический распад начался, но плато-фаза не была достигнута к 28 дню, однако в таких случаях химическое вещество не будет классифицировано как биоразлагаемое.