ГОСТ ISO/TS 22117-2013 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Специальные требования и руководство по проверке квалификации лабораторий с помощью межлабораторных сравнительных испытаний

     5 Технические требования и руководство по матрице образца и содержанию

5.1 Концентрация целевых микроорганизмов

Целевые микроорганизмы должны предоставляют в концентрациях, удобных для демонстрации того, что методы испытания пригодны для данной цели, и таких, чтобы их можно было обнаружить в анализируемых матрицах образца (ISO/IEC 17043, п.4.4.2.3). Если целевыми являются патогенные микроорганизмы, то концентрации необходимо учитывать с точки зрения опасности для здоровья человека и, при определенных обстоятельствах, пределов, устанавливаемых в предотвращении заболевания.

Примечание - Концентрация, представляющая опасность для здоровья человека, не всегда известна точно и зависит от восприимчивости отдельных людей. Цель исследования патогенности заключается в предотвращении заболевания, а также в выявлении патогенных микроорганизмов в очень малых концентрациях, пока они не достигли более высокого уровня.

Для количественных методов (методов подсчета) целевая концентрация должна соответствовать концентрациям, выявляемым повседневно, и любые установленные законом спецификации должны применяться к используемым матрицам образцов. Целевая концентрация может использоваться близко к пределу применения количественных методов, чтобы проверить результативность участников в применяемом диапазоне метода. Однако не следует применять образцы, концентрация микроорганизмов в которых так низка, что при использовании рутинных разведений ожидаемое среднее количество организмов в образце будет меньше 10 колоний на чашку.

Для качественных методов (методов выявления) обычно достаточно присутствия целевых микроорганизмов в низких концентрациях, чтобы обеспечить действительное заражение в данной методологии и получить для валидации, чтобы установить или проверить пределы обнаружения для отдельных лабораторий-участниц.

5.2 Источники, характеристики и прослеживаемость микроорганизмов

Характеристики целевых микроорганизмов устанавливают перед их использованием, чтобы надежно оценить результативность, особенно в программах, где всем участникам разрешается использовать различные методологии.

Как типичные, так и атипичные штаммы следует рассмотреть и включить в программу контроля результативности лаборатории.

Признанные контрольные штаммы, полученные из международных банков, следует использовать там, где они наиболее всего подходят для цели программы; однако, для более близкого отражения повседневных ситуаций используют полученные в лаборатории изоляты или "дикие" штаммы, выделенные из матриц, используемых в программах проверки квалификации лабораторий. Там, где они применяются, они должны быть проверены в соответствии со стандартными методами соответствующего международного стандарта, чтобы обеспечить для организаторов проверки всех атипичных реакций до применения таких штаммов.

В любом случае микроорганизмы, используемые в образцах программ проверки квалификации, должны прослеживаться до соответствующего фонда культур или до достоверных данных, имеющихся у организаторов.

В определенных обстоятельствах невозможно использовать контрольные культуры или стандартные образцы (референтные материалы) из признанных на международном уровне банков или выращенных в лаборатории штаммов, например, для программ проверки квалификации в отношении некультивируемых организмов, таких как норовирусы человека. В таких обстоятельствах клинический материал можно использовать для искусственного заражения испытуемой матрицы, при погружении, распылении, в случае двустворчатого моллюска, или посредством бионакопления. Метод искусственного заражения должен быть максимально приближен к "естественному" пути заражения. Особое внимание необходимо уделить при работе с клиническим материалом человека, пробами фекальных или рвотных масс, которые необходимо обеспечить защитой от сторонних патогенных организмов перед использованием. Целевые вирусы должны быть полностью описаны с точки зрения концентрации штамма с помощью стандартной цепной полимеразной реакции с последующим секвенированием.

5.3 Фоновая флора

Общая флора образцов, искусственно привнесенная или полученная естественным образом, должна быть выбрана для оценки способности участников обнаружить и/или подсчитать целевые микроорганизмы в присутствии нецелевой флоры (типичной для матрицы образца) и презумптивных целевых микроорганизмов, которые, без соответствующих подтверждений, могут привести к ложным положительным результатам.

Любые штаммы, используемые для имитации фоновой флоры, должны соответствовать требованиям 5.2 в отношении описания и прослеживаемости. В образцах, зараженных естественным образом, влияние фоновой флоры на целевые микроорганизмы необходимо определить.

5.4 Выбор матрицы и матричные эффекты

Все матрицы необходимо оценить, прежде чем использовать их для проверки на какое-либо влияние на целевые микроорганизмы и фоновую флору, например, когда матрицы уменьшают восстановление введенных микроорганизмов.

Участники должны быть внимательны к природе матрицы пищевого продукта, если известно, что такие матрицы неблагоприятно влияют на восстановление микроорганизмов (например, те, которые связывают и удерживают клетки, например, жирные материалы) или обладают бактерицидными или бактериостатическими свойствами. Для информации участников необходимо включить подходящие и подтвержденные методики подготовки матриц.

Матрицы образцов, используемые для программ проверки квалификации микробиологических лабораторий, зачастую, но необязательно, стерилизуют перед применением. Там, где распределяют натуральные, нестерилизованные образцы, организаторам необходимо определить влияние фоновой микрофлоры образцов.