ГОСТ 32372-2013 Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. In vitro 3T3 NRU тест на фототоксичность

     3 Принцип метода испытания

In vitro 3Т3 NRU тест по изучению фототоксичности основан на сравнении цитотоксичности химического вещества при его воздействии в условиях присутствия и отсутствия нецитотоксичной дозы имитируемого солнечного света. Цитотоксичность в данном тесте выражается как зависимое от концентрации снижение поглощения витального красителя нейтрального красного и измеряемое через 24 часа после воздействия исследуемым химическим веществом и облучением. Изменение чувствительности поверхности лизосомной мембраны ведет к лизосомной хрупкости и другим изменениям, которые постепенно становятся необратимыми. Подобные изменения вызваны воздействием ксенобиотиков, в результате которого снижается поглощение и связывание нейтрального красного. Таким образом, становится возможным отличить жизнеспособные, поврежденные или мертвые клетки, что является основой данного метода исследования.

Balb/c 3Т3 клетки выдерживают в питательной среде в течение 24 часов для формирования монослоев.

Два планшета с 96 ячейками для каждого исследуемого вещества выдерживают предварительно с восемью различными концентрациями вещества в течение часа.

Один из планшетов подвергают воздействию наивысшей нецитотоксичной дозой облучения, другой планшет оставляют в темноте. В обоих планшетах в тестируемую среду вносят культуру клеток и после следующих 24 часов инкубации по поглощению нейтрального красного определяют жизнеспособность клеток.

Жизнеспособность клеток выражается в процентах как по отношению к необработанному тестируемым веществом контролю и вычисляется для каждой тестовой концентрации.

Для определения фототоксического воздействия полученные реакции на концентрации исследуемых веществ в присутствии и при отсутствии облучения сравниваются с уровнем, полученным в эксперименте с необработанным контролем.