ГОСТ EN 15891-2013 Продукты пищевые. Определение дезоксиниваленола в продовольственном зерне, продуктах его переработки и продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и спектрофотометрического детектирования в ультрафиолетовой области спектра

     7 Анализ с помощью ВЭЖХ

7.1 Условия хроматографического анализа

Приведенные ниже параметры обеспечивают удовлетворительное качество хроматографического анализа (см. рисунок А.1, приложение А) при использовании оборудования по 5.15 и колонки по 5.15.3. При необходимости для достижения отделения пика дезоксиниваленола от сопутствующих пиков проводят корректировку состава подвижной фазы (объемной доли метанола и присутствия в ней уксусной кислоты) применительно к выбранной аналитической колонки для ВЭЖХ.

Скорость протока подвижной фазы через колонку - 1,0 см/мин.

Рабочая длина волны спектрофотометрического детектора - 220 нм.

Объем инжекции анализируемых растворов - от 100 мм до 300 мм.

При использовании устройства для переключения подвижных фаз по 5.15.6 применяют программу элюирования, приведенную в таблице 1.

Таблица 1 - Программа элюирования

При указанных выше условиях хроматографического анализа время удерживания пика дезоксиниваленола составляет около 11 мин (см. рисунок 1).

Примечание - Приемлемой альтернативой подвижным фазам указанного состава являются смеси ацетонитрила и воды, которые допустимо использовать при условии обеспечения ими удовлетворительного разделения пиков.

7.2 Приготовление градуировочных растворов

В мерные колбы вместимостью 10 см вносят стандартный раствор В по 4.24 в объемах, указанных в таблицах 2 и 3, растворитель выпаривают, объем содержимого в колбах доводят до метки дилюентом по 4.15 или подвижной фазой по 4.16.

Таблица 2 - Приготовление градуировочных растворов при испытании зерна пшеницы, кукурузы, рисовой и овсяной муки, поленты и концентратов типа сухого завтрака на пшеничной основе

Таблица 3 - Приготовление градуировочных растворов при испытании продуктов на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста

7.3 Построение градуировочного графика

Градуировку осуществляют ежедневно перед анализом растворов проб, для чего проводят хроматографический анализ приготовленных по 7.2 градуировочных растворов подходящего диапазона массовых концентраций при объеме инжекции от 100 до 300 мм. Градуировочный график строят, откладывая в системе координат значения массовой концентрации дезоксиниваленола в нанограммах на кубический сантиметр против соответствующих значений площади или высоты его пика. Полученный график проверяют на соответствие требованиям линейности с помощью регрессионного анализа (0,998).

7.4 Определение дезоксиниваленола в растворах проб

Проводят хроматографический анализ растворов проб по 6.6 при тех же условиях что были использованы при анализе градуировочных растворов, и объеме инжекции от 100 до 300 мм.

7.5 Идентификация пика аналита

Пик дезоксиниваленола на хроматограмме раствора анализируемой пробы идентифицируют по совпадению его времени удерживания со временем удерживания наиболее близкого ему по площади пика дезоксиниваленола на хроматограмме соответствующего градуировочного раствора. Необходимо, чтобы массовая концентрация дезоксиниваленола в растворе пробы находилась в границах диапазона градуировки. Если массовая концентрация дезоксиниваленола в растворе пробы превышает верхнюю границу диапазона градуировки, раствор пробы разбавляют в требуемой мере дилюентом для ВЭЖХ или подвижной фазой и проводят его повторный хроматографический анализ. Разбавление раствора пробы учитывают во всех последующих расчетах.