ГОСТ EN 15891-2013

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДЕЗОКСИНИВАЛЕНОЛА В ПРОДОВОЛЬСТВЕННОМ ЗЕРНЕ, ПРОДУКТАХ ЕГО ПЕРЕРАБОТКИ И ПРОДУКТАХ НА ЗЕРНОВОЙ ОСНОВЕ ДЛЯ ПИТАНИЯ ГРУДНЫХ ДЕТЕЙ И ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА

Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и спектрофотометрического детектирования в ультрафиолетовой области спектра

Foodstuffs. Determination of deoxynivalenol in cereals, cereal products and cereal based foods for infants and young children. HPLC method with immunoaffinity column cleanup and UV detection

МКС 67.060

Дата введения 2015-07-01

     

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") при участии специалистов Государственного научного учреждения Всероссийского научно-исследовательского института консервной и овощесушильной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии) на основе собственного аутентичного перевода на русский язык европейского регионального стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 335)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 57-П от 27 июня 2013 г.)

За принятие проголосовали:

4 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 15891:2010* "Foodstuffs. Determination of deoxynivalenol in cereals, cereal products and cereal based foods for infants and young children. HPLC method with immunoaffinity column cleanup and UV detection" (Продукты пищевые. Определение дезоксиниваленола в продовольственном зерне, продуктах его переработки и продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и спектрофотометрического детектирования в ультрафиолетовой области спектра).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Перевод с английского языка (en)

Официальный экземпляр европейского регионального стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеется в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 08 ноября 2013 г. N 1517-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 15891-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения дезоксиниваленола в продовольственном зерне (в том числе, в муке), пищевых продуктах на зерновой основе, а также продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением очистки экстракта на колонке с иммуноаффинным сорбентом и спектрофотометрического детектирования в ультрафиолетовой области спектра.

Метод прошел валидацию путем трех межлабораторных испытаний. В одном случае объектами испытаний были пробы зерна пшеницы и кукурузы, рисовой и овсяной муки, кукурузной каши (поленты) и пищевого концентрата типа сухого завтрака на пшеничной основе с содержанием дезоксиниваленола в диапазоне от 85,4 до 1768 мкг/кг. В другом случае объектами испытаний были пробы зерна пшеницы, и кукурузы с содержанием дезоксиниваленола в диапазоне от 165 до 4700 мкг/кг. В третьем случае объектами испытаний были пробы продуктов на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста с содержанием дезоксиниваленола в диапазоне от 58 до 452 мкг/кг. Подробная информация о валидации метода приведена в разделе 9 и в приложении В.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Применение настоящего стандарта предусматривает использование опасных веществ, материалов, процедур и оборудования. В задачи настоящего стандарта не входит решение проблем, связанных с обеспечением безопасности при его применении. Ответственность за принятие надлежащих мер предосторожности и соблюдение правил техники безопасности лежит на пользователе настоящего стандарта.

     2 Нормативные ссылки

Приведенные ниже ссылочные нормативные документы являются обязательными для применения настоящего стандарта. Датированные ссылки предполагают возможность использования только указанного издания документа. В случае недатированных ссылок используют последнее издание документа, включая все дополнения.

EN ISO 3696:1995 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

     3 Сущность метода

Метод основан на экстракции дезоксиниваленола из пробы водой, последующем удалении из экстракта веществ, мешающих анализу, путем очистки на колонке с иммуноаффинным сорбентом и количественном определения дезоксиниваленола с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) со спектрофотометрическим детектированием в ультрафиолетовой области спектра.

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696:1995. Используемые растворители по степени чистоты должны быть пригодны для применения в анализе с помощью ВЭЖХ. Допускается использовать доступные для приобретения готовые растворы, характеристики которых не отличаются от приведенных ниже.

4.2 Натрий фосфорнокислый двухзамещенный безводный или гидратированный .

4.3 Калий хлористый.

4.4 Калий фосфорнокислый однозамещенный.

4.5 Натрий хлористый.

4.6 Натрия гидроксид.

4.7 Кислота соляная, раствор массовой долей 37%.

4.8 Кислота соляная, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм

Раствор готовят разбавлением 8,28 см раствора соляной кислоты по 4.7 водой до 1 дм.

4.9 Натрия гидроксид, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм

Раствор готовят растворением 4 г гидроксида натрия по 4.6 в 1 дм воды.

4.10 Раствор фосфатно-хлоридный буферный молярной концентрации хлористого натрия 120 ммоль/дм, хлористого калия 2,7 ммоль/дм, фосфатного буфера 10 ммоль/дм, 7,4 ед. рН

Растворяют 8,0 г хлористого натрия по 4.5, 1,2 г безводного двухзамещенного фосфорнокислого натрия [или 2,9 г гидратированного двухзамещенного фосфорнокислого натрия ] по 4.2, 0,2 г однозамещенного фосфорнокислого калия по 4.4 и 0,2 г хлористого калия по 4.3 в 900 см воды.

Значение рН приготовленного раствора доводят до 7,4 ед. рН путем добавления раствора соляной кислоты по 4.8 либо раствора гидроксида натрия по 4.9, после чего объем раствора доводят водой до 1 дм. В качестве альтернативы допускается использовать доступный для приобретения готовый раствор с аналогичными характеристиками.

4.11 Ацетонитрил.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Ацетонитрил является токсичным веществом, поэтому все операции по приготовлению растворов, содержащих ацетонитрил, следует проводить в вытяжном шкафу с использованием взрывобезопасного перемешивающего устройства. Фильтрование растворов, содержащих ацетонитрил, следует проводить также в вытяжном шкафу.

4.12 Полиэтиленгликоль молекулярной массой около 8000 г/моль.

4.13 Метанол.

4.14 Кислота уксусная массовой долей 96% или кислота уксусная ледяная массовой долей 100%.

4.15 Растворитель - дилюент для приготовления раствора пробы для анализа с помощью ВЭЖХ

Смешивают 9,5 объемных частей метанола по 4.13 с 90,5 объемными частями воды.

4.16 Подвижная фаза для ВЭЖХ

Смешивают 15 объемных частей метанола по 4.13 с 85 объемными частями воды. К полученной смеси добавляют 0,1 объемной части уксусной кислоты по 4.14. При необходимости проводят корректировку состава подвижной фазы (объемной доли метанола и присутствия в ней уксусной кислоты) применительно к выбранной аналитической колонке для ВЭЖХ. Перед использованием подвижную фазу дегазируют.

4.17 Подвижная фаза для кондиционирования аналитической колонки

Смешивают 50 объемных частей метанола по 4.13 с 50 объемными частями воды.

4.18 Колонка с иммуноаффинным сорбентом

Для проведения испытания пригодна колонка с иммуноаффинным сорбентом, содержащим иммобилизованные антитела, специфичные в отношении дезоксиниваленола, имеющая сорбционную емкость по дезоксиниваленолу не менее 1000 нг и обеспечивающая полноту обнаружения не менее 80% при внесении в нее 500 нг дезоксиниваленола в водном растворе объемом от 1 до 2 см.

4.19 Дезоксиниваленол массовой долей основного вещества не менее 97%.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Дезоксиниваленол является высокотоксичным веществом. Все работы, связанные с подготовкой пробы и приготовлением стандартных растворов, должны проводиться в вытяжном шкафу с использованием перчаток и защитных очков.

4.20 Дезоксиниваленол, основной раствор массовой концентрации 1,25 мг/см (основной раствор I)

Порцию дезоксиниваленола по 4.19 массой около 5 мг растворяют в 4,0 см ацетонитрила по 4.11. Массовая концентрация дезоксиниваленола в полученном растворе составляет около 1,25 мг/см. В качестве альтернативы можно использовать доступный для приобретения стандартный образец состава раствора дезоксиниваленола с такими же характеристиками.

Основной раствор I хранят при температуре около минус 18 °С, при этом срок его годности составляет 12 мес. При хранении основного раствора I более 6 мес перед его использованием проверяют соответствие фактической массовой концентрации дезоксиниваленола приписанному значению.

4.21 Дезоксиниваленол, основной раствор массовой концентрации 250 мкг/см (основной раствор II)

Порцию основного раствора I по 4.20 объемом 800 мм разбавляют ацетонитрилом по 4.11 до объема 4 см. Массовая концентрация дезоксиниваленола в полученном растворе составляет около 250 мкг/см. Основной раствор II хранят при температуре около минус 18 °С, при этом срок его годности составляет 12 мес. При хранении основного раствора II более 6 мес перед его использованием проверяют соответствие фактической массовой концентрации дезоксиниваленола приписанному значению.

4.22 Дезоксиниваленол, стандартный раствор А