ГОСТ Р ИСО 13496-2013 Мясо и мясные продукты. Обнаружение красителей. Метод тонкослойной хроматографии (Переиздание)

     9 Процедура

Предупреждения

Если проба содержит индигокармин, то ее температура в течение всего анализа не должна превышать 35°С. Индигокармин частично распадается в хроматографическом растворе I, поэтому необходимо использовать хроматографический раствор II.

Эритрозин чувствителен к воздействию света. Поэтому при любых перерывах в ходе анализа растворы и пластинки необходимо хранить в темном месте. То же самое относится к индигокармину.

9.1 Проба для анализа

В центрифужной пробирке (см. 6.2) взвешивают 5 г подготовленной пробы (см. раздел 8) с точностью до 0,1 г.

Дальнейшие процедуры для проб, содержащих жир, описаны в 9.2.

Дальнейшие процедуры для проб, не содержащих жир, описаны в 9.3

9.2 Пробы, содержащие жир

В центрифужную пробирку добавляют около 20 см петролейного эфира (см. 5.2) и перемешивают стеклянной палочкой. Петролейный эфир декантируют.

Эту процедуру повторяют три раза.

9.3 Пробы, не содержащие жир

В центрифужную пробирку добавляют 25 см кипящей воды (см. предупреждение выше) и перемешивают. Добавляют 25 см элюента (см. 5.11).

С помощью рН-метра (см. 6.11) проверяют, находится ли рН в интервале (9±0,5) ед. рН. Если рН выходит за указанный интервал, то его доводят до необходимой величины уксусной кислотой (см. 5.5) или раствором аммиака (см. 5.4).

Тщательно перемешивают. Охлаждают пробу в морозильной камере в течение 15 мин (для предотвращения помутнения).

Центрифугируют (см. 6.5) в течение 10 мин при радиальном ускорении около 2000 .

Декантируют прозрачный раствор в плоскодонную колбу (см. 6.3). В случае присутствия индигокармина используют круглодонную колбу (см. 6.4).

В центрифужную пробирку, содержащую осадок, добавляют 5 см воды. Перемешивают и добавляют 10 см элюента (см. 5.11). Снова перемешивают и центрифугируют как описано выше.

Эту процедуру повторяют, пока все красители не экстрагируются из пробы, затем объединяют все экстракты.

Смешанный экстракт упаривают на водяной бане до объема около 25 см для удаления метанола. В случае присутствия индигокармина используют круглодонную колбу (см. 6.4) и ротационный испаритель (см. 6.6) при температуре 35°С.

Добавляют 25 см кипящей воды (см. предупреждения) и перемешивают.

9.4 Перенос красителей на полиамидный порошок

С помощью уксусной кислоты (см. 5.5) или раствора аммиака (см. 5.4) доводят рН до значения от 4 до 5 ед. рН.

К теплому раствору (см. предупреждения) добавляют 1 г полиамидного порошка (см. 5.13). Энергично встряхивают в течение 1 мин.

Дают возможность порошку сформировать осадок.

Проверяют, окрашен ли раствор. Если раствор окрашен, то добавляют еще немного полиамидного порошка и энергично встряхивают.

Примечание - Некоторые натуральные красители (см. приложение В) не полностью адсорбируются на полиамидном порошке, оставляя раствор окрашенным, даже если все синтетические красители были полностью адсорбированы. Обычно по типу пробы можно заключить, присутствуют ли в ней такие натуральные красители.

Встряхивают и переносят теплую суспензию в хроматографическую колонку (см. 6.7).

Промывают плоскодонную колбу тремя порциями по 10 см горячей воды (см. предупреждения), добавляют каждый раз промывные воды в колонку. Промывают колонку другими тремя порциями по 10 см горячей воды (см. предупреждения) и затем тремя порциями по 5 см метанола (см. 5.3). Если натуральные красители элюируются, то продолжают промывать колонку метанолом, пока он не обесцветится.

9.5 Элюирование и концентрирование выделенных красителей