Используют реактивы только признанной аналитической чистоты, если нет иных указаний, и дистиллированную или деминерализованную воду, или воду равноценной чистоты.
5.1 Основные материалы
Основные материалы - по ISO 6887-5 и ISO/TS 11133-1.
5.2 Разбавители
Приготовление разбавителей - по ISO 6887-5.
Чтобы обеспечить сопоставимость результатов в установленных колониеобразующих единицах (КОЕ), соблюдают следующие правила.
Используют раствор Рингера (Ringer's) с 1/4 концентрации или любой другой подходящий разбавитель, установленный в ISO 6887-5 и подтвержденный как эквивалентный.
Стерилизуют и используют подходящий стерильный дозатор.
Доводят разбавитель до температуры (22±2)°С. Переносят разбавитель стеканием каплями, не захватывая воздух.
Неопределенность измерения используемых объемов должна соответствовать требованиям ISO 6887-1.
5.3 Питательная среда (среда TOS-MUP)
Используют свежеприготовленную среду на основе обработанных трансгалактозой олигосахаридов с добавлением литиевой соли мупироцина (TOS-MUP), защищенную от прямого солнечного света.
5.3.1 Основная среда (среда TOS-пропионат на агаре [10])
5.3.1.1 Состав:
пептон триптиказа - 10,0 г;
дрожжевой экстракт - 1,0 г;
- 3,0 г;
- 4,8 г;
- 3,0 г;
- 0,2 г;
- 0,5 г;
пропионат натрия - 15,0 г;
TOS (см. 5.3.1.2) - 10,0 г;
агар-агар - 15,0 г;
вода - 950 см.
5.3.1.2 Смесь олигосахаридов - трансгалактозы
Смесь TOS получают ферментативным гидролизом лактозы, используя -галактозидазу Aspergillus oryceae. Смесь TOS содержит галактозу (Gal) и глюкозу (Glc), вычисляемых по формуле
, (1)