ГОСТ EN 15850-2013

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение зеараленона в продуктах для детского питания на кукурузной основе, ячменной, кукурузной и пшеничной муке, поленте и продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста

Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и флуориметрическим детектированием

Foodstuffs. Determination of zearalenone in maize based baby food, barley flour, maize flour, polenta, wheat flour and cereal based foods for infants and young children. HPLC method with immunoaffinity column cleanup and fluorescence detection

     

МКС 67.060

        67.230*

_____________________

* По данным официального сайта Росстандарта ОКС  67.050,

здесь и далее. - Примечание изготовителя базы данных.

Дата введения 2015-07-01

     

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") при участии специалистов Государственного научного учреждения Всероссийского научно-исследовательского института консервной и овощесушильной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии) на основе собственного аутентичного перевода на русский язык европейского регионального стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 28 августа 2013 г. N 58-П)

За принятие проголосовали:

4 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 15850:2010* Foodstuffs. Determination of zearalenone in maize based baby food, barley flour, maize flour, polenta, wheat flour and cereal based foods for infants and young children. HPLC method with immunoaffinity column cleanup and fluorescence detection (Продукты пищевые. Определение зеараленона в продуктах для детского питания на кукурузной основе, ячменной, кукурузной и пшеничной муке, поленте и продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и флуориметрическим детектированием).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Перевод с английского языка (en).

Официальный экземпляр европейского регионального стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеется в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 1710-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 15850-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Октябрь 2016 г.

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения зеараленона в продуктах для детского питания на основе кукурузы, ячменной, кукурузной и пшеничной муке, поленте и продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением очистки экстракта на колонке с иммуноаффинным сорбентом и флуориметрическим детектированием. Метод прошел валидацию путем двух межлабораторных испытаний. В одном случае объектом испытаний были пробы продуктов для детского питания на основе кукурузы, ячменная, кукурузная, пшеничная мука и полента с содержанием зеараленона от 10 до 335 мкг/кг. Во втором случае объектом испытаний были пробы продуктов на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста с содержанием зеараленона от 9 до 44 мкг/кг.

Подробная информация о результатах валидации метода содержится в разделе 9 и приложении В.

     2 Нормативные ссылки

Приведенные ниже ссылочные нормативные документы являются обязательными для применения настоящего стандарта. Датированные ссылки предполагают возможность использования только указанного издания документа. В случае недатированных ссылок используют последнее издание документа, включая все дополнения.

EN ISO 3696:1995 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

     3 Сущность метода

Зеараленон экстрагируют из пробы водно-ацетонитрильной смесью или метанолом, в зависимости от вида пробы. Экстракт разбавляют фосфатно-хлоридным буферным раствором и пропускают через иммуноаффинную колонку, заполненную сорбентом, содержащим антитела, специфичные к зеараленону, при этом происходит очистка экстракта и концентрирование зеараленона. Зеараленон элюируют с колонки ацетонитрилом или метанолом, после чего количественно определяют с помощью ВЭЖХ с применением обращенно-фазовой аналитической колонки и флуориметрическим детектированием.

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения испытания при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696:1995. Используемые растворители по степени чистоты должны быть пригодны для применения в анализе с помощью ВЭЖХ, если не оговорены другие условия. Допускается использование доступных для приобретения готовых растворов при условии, что их характеристики не отличаются от приведенных ниже.

4.2 Натрий фосфорнокислый двухзамещенный безводный () или гидратированный ().

4.3 Калий хлористый.

4.4 Калий фосфорнокислый однозамещенный.

4.5 Натрий хлористый.

4.6 Натрия гидроксид.

4.7 Кислота соляная, водный раствор массовой долей w (HCI) = 37%.

4.8 Кислота соляная, раствор молярной концентрации c (HCI) = 0,1 моль/дм

Раствор готовят разбавлением 8,28 см раствора соляной кислоты по 4.7 водой до 1 дм.

4.9 Натрия гидроксид, раствор молярной концентрации c (NaOH) = 0,1 моль/дм

Растворяют 4 г гидроксида натрия по 4.6 в 1 дм воды.

4.10 Раствор фосфатно-хлоридный буферный молярной концентрации хлористого натрия с (NaCI) = 120 ммоль/дм, хлористого калия с (KCI) = 2,7 ммоль/дм, суммы фосфатов натрия и калия c () = 10 ммоль/дм, рН = 7,4

Растворяют 8,0 г хлористого натрия по 4.5, 1,2 г безводного двухзамещенного фосфорнокислого натрия [или 2,9 г гидратированного двухзамещенного фосфорнокислого натрия ()] по 4.2, 0,2 г однозамещенного фосфорнокислого калия по 4.4 и 0,2 г хлористого калия по 4.3 в 900 см воды.

Значение рН приготовленного раствора доводят до 7,4 путем добавления раствора соляной кислоты по 4.8 либо раствора гидроксида натрия по 4.9, после чего объем раствора доводят водой до 1 дм.

В качестве альтернативы для приготовления раствора допускается использовать доступный для приобретения препарат с аналогичными характеристиками.

4.11 Ацетонитрил.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Ацетонитрил является токсичным веществом, поэтому все операции по приготовлению растворов, содержащих ацетонитрил, следует проводить в вытяжном шкафу с использованием взрывобезопасного перемешивающего устройства. Фильтрование растворов, содержащих ацетонитрил, следует проводить также в вытяжном шкафу.

4.12 Метанол для ВЭЖХ.

4.13 Метанол технический.

4.14 Экстрагент А

Смешивают 75 объемных частей ацетонитрила по 4.11 с 25 объемными частями воды.

4.15 Дилюент А для приготовления раствора пробы для анализа с помощью ВЭЖХ

Смешивают четыре объемных части ацетонитрила по 4.11 с шестью объемными частями воды.

4.16 Подвижная фаза А для ВЭЖХ

Подвижную фазу готовят смешиванием 53 объемных частей ацетонитрила по 4.11 с 47 объемными частями воды. Перед использованием подвижную фазу фильтруют и дегазируют.

4.17 Экстрагент В

Смешивают 75 объемных частей метанола по 4.13 с 25 объемными частями воды.

4.18 Растворитель для промывания иммуноаффинной колонки

Смешивают 15 объемных частей метанола по 4.12 с 85 объемными частями фосфатно-хлоридного буферного раствора по 4.10.

4.19 Дилюент В для приготовления раствора пробы для анализа с помощью ВЭЖХ

Смешивают пять объемных частей метанола по 4.12 с пятью объемными частями воды.

4.20 Подвижная фаза В для ВЭЖХ

Смешивают 75 объемных частей метанола по 4.12 с 25 объемными частями воды. Перед использованием подвижную фазу фильтруют и дегазируют.

4.21 Колонка с иммуноаффинным сорбентом

Для проведения испытания пригодна колонка с иммуноаффинным сорбентом с иммобилизованными антителами, специфичными в отношении зеараленона, имеющая сорбционную емкость по зеараленону не менее 1500 нг и обеспечивающая полноту обнаружения не менее 80% при внесении в нее 75 нг зеараленона в 10 см раствора, состоящего из 15 объемных частей метанола и 85 объемных частей фосфатно-хлоридного буферного раствора.

4.22 Зеараленон кристаллический или в виде ампульного препарата в пленочной форме массовой долей основного вещества не менее 98%, или в виде готового раствора.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Зеараленон является эстрогенным веществом, поэтому с ним надлежит обращаться с особой осторожностью. Все работы, связанные с подготовкой пробы и приготовлением стандартных растворов должны проводиться в вытяжном шкафу с использованием защитной одежды, перчаток и защитных очков.

4.23 Зеараленон, основной раствор массовой концентрации 200 мкг/см

Готовят раствор зеараленона массовой концентрации около 1,25 мг/см путем растворения 5 мг зеараленона по 4.22 в 4,0 см ацетонитрила по 4.11. Порцию полученного раствора объемом 800 ммразбавляют ацетонитрилом по 4.11 до объема 5 см, получают основной раствор зеараленона массовой концентрации около 200 мкг/см.