ГОСТ EN 15835-2013

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение охратоксина А в продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста

Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и флуориметрического детектирования

Foodstuffs. Determination of ochratoxin A in cereal based foods for infants and young children. HPLC method with immunoaffinity column cleanup and fluorescence detection

МКС 67.050

         67.060*

_______________

* В ИУС 7-2016 документ приводится с ОКС 67.050; 67.230, здесь и далее по тексту.

- Примечание изготовителя базы данных.

Дата введения 2015-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") при участии специалистов Государственного научного учреждения Всероссийского научно-исследовательского института консервной и овощесушильной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии) на основе собственного аутентичного перевода на русский язык европейского регионального стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт) (ТК 335)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 июня 2013 г. N 57-П)

За принятие проголосовали:

4 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 15835:2010* Foodstuffs. Determination of ochratoxin A in cereal based foods for infants and young children. HPLC method with immunoaffinity column cleanup and fluorescence detection (Продукты пищевые. Определение охратоксина А в продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и флуориметрического детектирования).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Перевод с английского языка (en)

Официальный экземпляр европейского регионального стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеется в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 1707-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 15835-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения охратоксина А в продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением очистки экстракта на колонке с иммуноаффинным сорбентом и флуориметрическим детектированием. Метод прошел валидацию путем межлабораторных испытаний проб, загрязненных охратоксином А естественным и искусственным путем, в диапазоне содержания от 0,050 до 0,217 мкг/кг. Подробная информация о валидации метода приведена в разделе 8 и в приложении В. Дополнительные исследования показали, что метод применим в отношении продуктов для детского питания на зерновой основе, в состав которых входят восемь различных типов злаковых культур, мед и какао при содержании охратоксина А до 3,540 мкг/кг (см. приложение С и [6]).

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Применение настоящего стандарта предусматривает использование опасных веществ, материалов, процедур и оборудования. В задачи настоящего стандарта не входит решение проблем, связанных с обеспечением безопасности при его применении. Ответственность за принятие надлежащих мер предосторожности и соблюдение правил техники безопасности лежит на пользователе настоящего стандарта.

     2 Нормативные ссылки

Приведенные ниже ссылочные нормативные документы являются обязательными для применения настоящего стандарта. Датированные ссылки предполагают возможность использования только указанного издания документа. В случае недатированных ссылок используют последнее издание документа, включая все дополнения.

EN ISO 3696:1995, Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) [Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний (ISO 3696:1987)].

     3 Сущность метода

Анализируемую пробу экстрагируют метил-третбутиловым эфиром после добавления смешанного раствора фосфорной кислоты молярной концентрации 0,5 моль/дм и хлористого натрия молярной концентрации 2 моль/дм. Экстракт выпаривают и перерастворяют в смеси метанола с фосфатно-хлоридным буферным раствором. После удаления липофильных компонентов гексаном экстракт пропускают через колонку с иммуноаффинным сорбентом, содержащим антитела, специфичные к охратоксину А. Охратоксин А элюируют с колонки метанолом и определяют с помощью ВЭЖХ с детектированием по флуоресценции, для усиления которой применяют послеколоночную дериватизацию аммиаком.

Примечание - В некоторых исследованиях показана возможность использования ВЭЖХ без послеколоночной дериватизации аммиаком, однако чувствительность определения при этом, как минимум, в два раза ниже. В этом случае необходимо использовать другие параметры флуориметрического детектирования (длину волны возбуждения 333 нм, длину волны эмиссии 460 нм).

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по ЕN ISO 3696:1995. Используемые растворители по степени чистоты должны быть пригодны для применения в анализе с помощью ВЭЖХ. Допускается использовать доступные для приобретения готовые растворы при условии, что их характеристики не отличаются от приведенных ниже.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Утилизацию отработанных растворителей проводят в соответствии с требованиями законодательства по охране окружающей среды. Способы обезвреживания отработанных реактивов приведены в материалах Международного агентства по исследованию рака (IARC) [4].

4.2 Гелий газообразный очищенный сжатый.

4.3 Азот.

4.4 Натрий фосфорнокислый двухзамещенный безводный (NaHPO) или гидратированный (NaHPO·12HO).

4.5 Калий хлористый.

4.6 Калий фосфорнокислый однозамещенный.

4.7 Натрий хлористый.

4.8 Натрия гидроксид.

4.9 Аммония гидроксид, водный раствор массовой долей w (NHOH)=25% (реактив для послеколоночной дериватизации).

Перед использованием раствор дегазируют с применением дегазатора по 5.21.7.

4.10 Кислота соляная, раствор массовой долей w (HCl)=37% (по результатам ацидиметрического анализа).

4.11 Кислота фосфорная, раствор массовой долей w (HPO)=85%.

4.12 Кислота соляная, раствор молярной концентрации c(HCl)=0,1 моль/дм

Раствор готовят разбавлением 8,28 см раствора соляной кислоты по 4.10 водой до 1 дм.

4.13 Натрия гидроксид, раствор молярной концентрации c(NaOH)=0,1 моль/дм

Раствор готовят растворением 4 г гидроксида натрия по 4.8 в 1 дм воды.

4.14 Раствор фосфатно-хлоридный буферный молярной концентрации хлористого натрия c(NaCl)=120 ммоль/дм, хлористого калия c(KCl)=2,7 ммоль/дм, фосфатного буфера c(NaHPO+KHPO)=10 ммоль/дм, рН 7,4

Растворяют 8,0 г хлористого натрия по 4.7, 1,2 г безводного двухзамещенного фосфорнокислого натрия [или 2,9 г гидратированного двухзамещенного фосфорнокислого натрия (NaHPO·12HO)] по 4.4, 0,2 г однозамещенного фосфорнокислого калия по 4.6 и 0,2 г хлористого калия по 4.5 в 900 см воды.

Значение рН приготовленного раствора доводят до 7,4 ед. рН путем добавления раствора соляной кислоты по 4.12, либо раствора гидроксида натрия по 4.13, после чего объем раствора доводят водой до 1 дм. В качестве альтернативы допускается использовать доступный для приобретения готовый раствор с аналогичными характеристиками.

4.15 Смешанный раствор фосфорной кислоты концентрации 0,5 моль/дм и хлористого натрия молярной концентрации 2 моль/дм

Растворяют 118 г хлористого натрия по 4.7 примерно в 900 см воды. К раствору добавляют 33 см фосфорной кислоты по 4.11, объем полученного раствора доводят водой до 1 дм.

4.16 Кислота уксусная ледяная массовой долей w (CHCOOH)99,7%.

4.17 Кислота уксусная, раствор объемной долей 9%

Смешивают 90 см уксусной кислоты по 4.16 и 910 см воды.

4.18 Гексан.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Гексан является легковоспламеняющимся веществом. Все операции, предполагающие использование этого растворителя, должны проводиться в вытяжном шкафу. Длительный контакт с этим реактивом может привести к серьезным последствиям для здоровья.

4.19 Метанол для градиентной ВЭЖХ.

4.20 Толуол.

4.21 Смесь метанола и раствора уксусной кислоты

Смешивают 72 объемных части метанола по 4.19 с 18 частями раствора уксусной кислоты по 4.17.

4.22 Метил-третбутиловый эфир.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Метил-третбутиловый эфир является взрывоопасным реактивом, поэтому экстракцию проб следует проводить с использованием взрывобезопасного блендера, помещенного в вытяжной шкаф. Центрифугирование экстрактов следует проводить при пониженных температурах (от 4°С до 8°С).

4.23 Смесь толуола и уксусной кислоты