ГОСТ EN 14352-2013 Продукты пищевые. Определение фумонизинов B(1) и B(2) в продуктах на основе кукурузы. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и дистиллированную воду или воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696. Используемые растворители по степени чистоты должны быть пригодны для применения в анализе с помощью ВЭЖХ.

4.2 Метанол.

4.3 Ацетонитрил.

4.4 Кислота ортофосфорная объемной долей .

4.5 Ортофталевый диальдегид.

4.6 2-Меркаптоэтанол.

4.7 Натрий фосфорнокислый однозамещенный, раствор концентрации моль/дм

Раствор готовят растворением 15,6 г однозамещенного фосфата натрия в 1 дм воды.

4.8 Натрий тетраборнокислый, раствор концентрации моль/дм

Раствор готовят растворением 3,8 гтетрабората натрия в 100 см воды.

4.9 Натрий хлористый.

4.10 Натрий фосфорнокислый двухзамещенный .

4.11 Калий фосфорнокислый однозамещенный .

4.12 Калий хлористый.

4.13 Кислота соляная концентрированная.

4.14 Экстрагент

Экстрагент готовят смешиванием 25 объемных частей ацетонитрила по 4.3, 25 объемных частей метанола по 4.2 и 50 объемных частей воды.

4.15 Смесь водно-ацетонитрильная объемной долей ацетонитрила

Смешивают 50 объемных частей ацетонитрила по 4.3 с 50 объемными частями воды.

4.16 Раствор фосфатно-хлоридный буферный

Растворяют 8,0 г хлористого натрия по 4.9, 1,2 г двухзамещенного фосфорнокислого натрия по 4.10, 0,2 г однозамещенного фосфорнокислого калия по 4.11 и 0,2 г хлористого калия по 4.12 в 990 см воды. Значение рН приготовленного раствора доводят до 7,0 ед. рН добавлением соляной кислоты по 4.13, после чего объем раствора доводят водой до 1 дм. В качестве альтернативы допускается использовать доступные для приобретения таблетированный препарат или готовый раствор.

4.17 Колонка с иммуноаффинным сорбентом

Для проведения испытания пригодна колонка с иммуноаффинным сорбентом, содержащим иммобилизованные антитела, специфичные в отношении фумонизинов B и В, имеющая общую сорбционную емкость по отношению к фумонизинам не менее 5 мкг и обеспечивающая полноту обнаружения не менее 90% при внесении в нее 5 мкг фумонизинов B и В в смеси метанола или ацетонитрила с фосфатно-хлоридным буферным раствором, при этом объемная доля метанола или ацетонитрила не должна превышать 10%. Перед использованием колонку выдерживают до достижения ею комнатной температуры.

4.18 Подвижная фаза для ВЭЖХ

Смешивают 77 объемных частей метанола по 4.2 с 23 объемными частями раствора однозамещенного фосфорнокислого натрия по 4.7. Значение рН полученного раствора доводят до 3,35 добавлением ортофосфорной кислоты по 4.4. Подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр по 5.14.

При необходимости проводят корректировку состава подвижной фазы применительно к свойствам аналитической колонки для ВЭЖХ.

4.19 Реактив для дериватизации фумонизинов

Растворяют 40 мг ортофталевого диальдегида по 4.5 в 1 см метанола по 4.2. Добавляют 5 см раствора тетраборнокислого натрия по 4.8 и 50 мм 2-меркаптоэтанола по 4.6, полученный раствор перемешивают.