ГОСТ ЕN 14352-2013

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

Продукты пищевые

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФУМОНИЗИНОВ В И В В ПРОДУКТАХ НА ОСНОВЕ КУКУРУЗЫ

Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта

Foodstuffs. Determination of fumonisins В and В in maize based foods. HPLC method with immunoaffinity column clean up

МКС 67.050

        67.060

Дата введения 2015-07-01

     

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены".

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") при участии специалистов Государственного научного учреждения Всероссийского научно-исследовательского института консервной и овощесушильной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии) на основе собственного аутентичного перевода на русский язык европейского регионального стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 335)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 июня 2013 г. N 57-П)

За принятие проголосовали:

4 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 14352:2004* "Foodstuffs - Determination of fumonisins В and В in maize based foods. HPLC method with immunoaffinity column clean up" (Продукты пищевые. Определение фумонизинов В и В в продуктах на основе кукурузы. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Перевод с английского языка (en)

Официальный экземпляр европейского регионального стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеется в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 08.11.2013 N 1515-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14352-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения фумонизинов В и В в пищевых продуктах на основе кукурузы с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением очистки экстракта на колонке с иммуноаффинным сорбентом [1], [2], [3].

Метод прошел валидацию путем межпабораторных испытаний, выполненных в соответствии с Руководством АОАС по процедуре проведения межпабораторных испытаний [4] для определения характеристик эффективности метода анализа. Объектами испытаний были пробы кукурузной муки и хлопьев с содержанием фумонизина В в диапазоне от 323 до 1414 мкг/кг и фумонизина В в диапазоне от 90 до 558 мкг/кг.

     2 Нормативные ссылки

Приведенные ниже ссылочные нормативные документы являются обязательными для применения настоящего стандарта. Датированные ссылки предполагают возможность использования только указанного издания документа. В случае недатированных ссылок используют последнее издание документа, включая все дополнения.

EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

     3 Сущность метода

Фумонизины экстрагируют из пробы смесью воды, метанола и ацетонитрила. Экстракт фильтруют и подвергают очистке на колонке с иммуноаффинным сорбентом. Фумонизины элюируют метанолом, элюат выпаривают, сухой остаток перерастворяют в смеси ацетонитрила с водой с добавлением ортофталевого диальдегида и 2-меркаптоэтанола для получения флуоресцирующих производных фумонизинов. Количественное определение фумонизинов проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением аналитической колонки с обращенно-фазовым сорбентом и флуориметрического детектирования.

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и дистиллированную воду или воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696. Используемые растворители по степени чистоты должны быть пригодны для применения в анализе с помощью ВЭЖХ.

4.2 Метанол.

4.3 Ацетонитрил.

4.4 Кислота ортофосфорная объемной долей .

4.5 Ортофталевый диальдегид.

4.6 2-Меркаптоэтанол.

4.7 Натрий фосфорнокислый однозамещенный, раствор концентрации моль/дм

Раствор готовят растворением 15,6 г однозамещенного фосфата натрия в 1 дм воды.

4.8 Натрий тетраборнокислый, раствор концентрации моль/дм

Раствор готовят растворением 3,8 гтетрабората натрия в 100 см воды.

4.9 Натрий хлористый.

4.10 Натрий фосфорнокислый двухзамещенный .

4.11 Калий фосфорнокислый однозамещенный .

4.12 Калий хлористый.

4.13 Кислота соляная концентрированная.

4.14 Экстрагент

Экстрагент готовят смешиванием 25 объемных частей ацетонитрила по 4.3, 25 объемных частей метанола по 4.2 и 50 объемных частей воды.

4.15 Смесь водно-ацетонитрильная объемной долей ацетонитрила

Смешивают 50 объемных частей ацетонитрила по 4.3 с 50 объемными частями воды.

4.16 Раствор фосфатно-хлоридный буферный

Растворяют 8,0 г хлористого натрия по 4.9, 1,2 г двухзамещенного фосфорнокислого натрия по 4.10, 0,2 г однозамещенного фосфорнокислого калия по 4.11 и 0,2 г хлористого калия по 4.12 в 990 см воды. Значение рН приготовленного раствора доводят до 7,0 ед. рН добавлением соляной кислоты по 4.13, после чего объем раствора доводят водой до 1 дм. В качестве альтернативы допускается использовать доступные для приобретения таблетированный препарат или готовый раствор.

4.17 Колонка с иммуноаффинным сорбентом

Для проведения испытания пригодна колонка с иммуноаффинным сорбентом, содержащим иммобилизованные антитела, специфичные в отношении фумонизинов B и В, имеющая общую сорбционную емкость по отношению к фумонизинам не менее 5 мкг и обеспечивающая полноту обнаружения не менее 90% при внесении в нее 5 мкг фумонизинов B и В в смеси метанола или ацетонитрила с фосфатно-хлоридным буферным раствором, при этом объемная доля метанола или ацетонитрила не должна превышать 10%. Перед использованием колонку выдерживают до достижения ею комнатной температуры.

4.18 Подвижная фаза для ВЭЖХ

Смешивают 77 объемных частей метанола по 4.2 с 23 объемными частями раствора однозамещенного фосфорнокислого натрия по 4.7. Значение рН полученного раствора доводят до 3,35 добавлением ортофосфорной кислоты по 4.4. Подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр по 5.14.

При необходимости проводят корректировку состава подвижной фазы применительно к свойствам аналитической колонки для ВЭЖХ.

4.19 Реактив для дериватизации фумонизинов

Растворяют 40 мг ортофталевого диальдегида по 4.5 в 1 см метанола по 4.2. Добавляют 5 см раствора тетраборнокислого натрия по 4.8 и 50 мм 2-меркаптоэтанола по 4.6, полученный раствор перемешивают.

Срок годности реактива для дериватизации - 1 неделя при хранении при комнатной температуре в темном месте в укупоренном сосуде темного стекла.

4.20 Фумонизины B и В, основные растворы

Готовят основные растворы фумонизина B и фумонизина В в водно-ацетонитрильной смеси по 4.15 массовой концентрации 50 мкг/см. Основные растворы фумонизинов хранят при температуре около 4 °С, при этом срок их годности составляет не менее 6 мес.

4.21 Фумонизины B и В, смешанный основной раствор

В мерную колбу вместимостью 5 см помещают 1000 мм основного раствора фумонизина B и 500 мм основного раствора фумонизина В. Объем содержимого в колбе доводят до метки водно-ацетонитрильной смесью по 4.15, после чего содержимое колбы тщательно перемешивают. Массовая концентрация фумонизина B в полученном растворе составляет 10 нг/мм, фумонизина В - 5 нг/мм. Раствор хранят при температуре 4 °С, при этом срок его годности составляет не менее 6 мес. Допускается готовить смешанный основной раствор фумонизинов в меньшем объеме.

4.22 Фумонизины B и В, смешанные градуировочные растворы