ГОСТ EN 13585-2013 Продукты пищевые. Определение фумонизинов В(1) и В(2) в кукурузе. Метод ВЭЖХ с применением очистки экстракта методом твердофазной экстракции

     4 Реактивы и материалы

4.1 Общие положения

Для проведения испытания при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и дистиллированную воду или воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696. Используемые растворители по степени чистоты должны быть пригодны для применения в анализе с помощью ВЭЖХ.

4.2 Метанол.

4.3 Смесь водно-метанольная объемной долей метанола 75%

Смешивают 75 объемных частей метанола по 4.2 с 25 объемными частями воды.

4.4 Смесь водно-ацетонитрильная объемной долей ацетонитрила 50%

Смешивают 50 объемных частей ацетонитрила с 50 объемными частями воды.

4.5 Кислота ортофосфорная объемной долей 85%.

4.6 Смесь метанола и уксусной кислоты объемной долей уксусной кислоты 1% для элюирования фумонизинов при твердофазной экстракции

Смешивают 99 объемных частей метанола по 4.2 с 1 объемной частью ледяной уксусной кислоты.

4.7 Ортофталевый диальдегид.

4.8 2-Меркаптоэтанол.

4.9 Натрий фосфорнокислый однозамещенный, раствор молярной концентрации  0,1 моль/дм

Раствор готовят растворением 15,6 г однозамещенного фосфата натрия в 1 дм воды.

4.10 Натрий тетраборнокислый, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм

Раствор готовят растворением 3,8 г тетрабората натрия в 100 см воды.

4.11 Натрия гидроксид, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм

Раствор готовят растворением 0,4 г гидроксида натрия в 100 см воды.

4.12 Подвижная фаза для ВЭЖХ

Смешивают 77 объемных частей метанола по 4.2 с 23 объемными частями раствора однозамещенного фосфорнокислого натрия по 4.9. Значение pH полученного раствора доводят до 3,35 ед. pH добавлением ортофосфорной кислоты по 4.5. Подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр по 5.7.

При необходимости проводят корректировку состава подвижной фазы применительно к свойствам аналитической колонки для ВЭЖХ.

4.13 Реактив для дериватизации фумонизинов

Растворяют 40 мг ортофталевого диальдегида по 4.7 в 1 см метанола по 4.2. Добавляют 5 см раствора тетраборнокислого натрия по 4.10 и 50 мм 2-меркаптоэтанола по 4.8, полученный раствор перемешивают. Срок годности реактива для дериватизации - одна неделя при хранении при комнатной температуре в темном месте в укупоренном сосуде темного стекла.

4.14 Фумонизины В и В, градуировочный раствор

Готовят основные растворы фумонизина В и фумонизина В по отдельности в водно-ацетонитрильной смеси по 4.4 массовой концентрации 250 мкг/см. Допускается использовать доступные для приобретения готовые растворы фумонизинов.

Порцию каждого основного раствора объемом 100 мм переносят в стеклянный флакон, затем добавляют 300 мм водно-ацетонитрильной смеси. Получают градуировочный раствор смеси фумонизинов В и В объемом 500 мм массовой концентрации каждого фумонизина 50 мкг/см. Если предполагается проведение градуировки с помощью градуировочного графика, готовят несколько градуировочных растворов. Для этого порции каждого основного раствора различного объема (например, 20, 50, 100 и 200 мм) разбавляют водно-ацетонитрильной смесью до объема 500 мм.

Стандартные растворы фумонизинов хранят при температуре около 4 °C, при этом срок их годности составляет не менее 6 мес.