ГОСТ EN 13585-2013

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

Продукты пищевые

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФУМОНИЗИНОВ В И В В КУКУРУЗЕ

Метод ВЭЖХ с применением очистки экстракта методом твердофазной экстракции

Foodstuffs. Determination of fumonisins B and B in maize. HPLC method with solid phase extraction clean-up

МКС 67.050

         67.060

Дата введения 2015-07-01

     

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") при участии специалистов Государственного научного учреждения Всероссийского научно-исследовательского института консервной и овощесушильной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии) на основе собственного аутентичного перевода на русский язык европейского регионального стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 335)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 июня 2013 г. N 57-П)

За принятие проголосовали:

4 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 13585:2001* "Foodstuffs. Determination of fumonisins B and B in maize. HPLC method with solid phase extraction clean-up" (Продукты пищевые. Определение фумонизинов B и B в кукурузе. Метод ВЭЖХ с применением очистки экстракта методом твердофазной экстракции).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Перевод с английского языка (en).

Официальный экземпляр европейского регионального стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеется в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 31 октября 2013 г. N 1294-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 13585-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения фумонизинов В и В в кукурузе с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Метод прошел валидацию путем межлабораторных испытаний, выполненных в соответствии с Руководством АОАС по процедуре проведения межлабораторных испытаний [1]. Объектом испытаний были пробы кукурузы с содержанием фумонизина В в диапазоне от 405 до 6732 мкг/кг и фумонизина В в диапазоне от 152 до 2619 мкг/кг. Метод пригоден для определения фумонизинов в зерне кукурузы или продуктах его первичной переработки (например, сырой, сушеной и молотой кукурузе), но не обеспечивает получение достоверных результатов при испытании большинства продуктов на основе кукурузы.

     2 Нормативные ссылки

Приведенные ниже ссылочные нормативные документы являются обязательными для применения настоящего стандарта. Датированные ссылки предполагают возможность использования только указанного издания документа. В случае недатированных ссылок используют последнее издание документа, включая все дополнения.

EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний).

     3 Сущность метода

Фумонизины экстрагируют из пробы кукурузы смесью метанола и воды. Экстракт фильтруют и подвергают очистке методом твердофазной экстракции на патроне с сильным анионообменным сорбентом. Фумонизины элюируют смесью метанола с уксусной кислотой, элюат выпаривают, сухой остаток перерастворяют в смеси метанола с водой с добавлением ортофталевого диальдегида и 2-меркаптоэтанола для получения флуоресцирующих производных фумонизинов. Количественное определение фумонизинов проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением аналитической колонки с обращенно-фазовым сорбентом и флуориметрического детектирования.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Фумонизины являются гепатотоксичными, нефротоксичными и канцерогенными веществами в отношении крыс и мышей. Их воздействие на человека окончательно не установлено. Следует соблюдать соответствующие меры предосторожности при обращении с фумонизинами. Любое лабораторное оборудование, контактировавшее с фумонизинами, следует промыть раствором гипохлорита натрия массовой долей 5%.

     4 Реактивы и материалы

4.1 Общие положения

Для проведения испытания при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и дистиллированную воду или воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696. Используемые растворители по степени чистоты должны быть пригодны для применения в анализе с помощью ВЭЖХ.

4.2 Метанол.

4.3 Смесь водно-метанольная объемной долей метанола 75%

Смешивают 75 объемных частей метанола по 4.2 с 25 объемными частями воды.

4.4 Смесь водно-ацетонитрильная объемной долей ацетонитрила 50%

Смешивают 50 объемных частей ацетонитрила с 50 объемными частями воды.

4.5 Кислота ортофосфорная объемной долей 85%.

4.6 Смесь метанола и уксусной кислоты объемной долей уксусной кислоты 1% для элюирования фумонизинов при твердофазной экстракции

Смешивают 99 объемных частей метанола по 4.2 с 1 объемной частью ледяной уксусной кислоты.

4.7 Ортофталевый диальдегид.

4.8 2-Меркаптоэтанол.

4.9 Натрий фосфорнокислый однозамещенный, раствор молярной концентрации  0,1 моль/дм

Раствор готовят растворением 15,6 г однозамещенного фосфата натрия в 1 дм воды.

4.10 Натрий тетраборнокислый, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм

Раствор готовят растворением 3,8 г тетрабората натрия в 100 см воды.

4.11 Натрия гидроксид, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм

Раствор готовят растворением 0,4 г гидроксида натрия в 100 см воды.

4.12 Подвижная фаза для ВЭЖХ

Смешивают 77 объемных частей метанола по 4.2 с 23 объемными частями раствора однозамещенного фосфорнокислого натрия по 4.9. Значение pH полученного раствора доводят до 3,35 ед. pH добавлением ортофосфорной кислоты по 4.5. Подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр по 5.7.

При необходимости проводят корректировку состава подвижной фазы применительно к свойствам аналитической колонки для ВЭЖХ.

4.13 Реактив для дериватизации фумонизинов

Растворяют 40 мг ортофталевого диальдегида по 4.7 в 1 см метанола по 4.2. Добавляют 5 см раствора тетраборнокислого натрия по 4.10 и 50 мм 2-меркаптоэтанола по 4.8, полученный раствор перемешивают. Срок годности реактива для дериватизации - одна неделя при хранении при комнатной температуре в темном месте в укупоренном сосуде темного стекла.

4.14 Фумонизины В и В, градуировочный раствор

Готовят основные растворы фумонизина В и фумонизина В по отдельности в водно-ацетонитрильной смеси по 4.4 массовой концентрации 250 мкг/см. Допускается использовать доступные для приобретения готовые растворы фумонизинов.

Порцию каждого основного раствора объемом 100 мм переносят в стеклянный флакон, затем добавляют 300 мм водно-ацетонитрильной смеси. Получают градуировочный раствор смеси фумонизинов В и В объемом 500 мм массовой концентрации каждого фумонизина 50 мкг/см. Если предполагается проведение градуировки с помощью градуировочного графика, готовят несколько градуировочных растворов. Для этого порции каждого основного раствора различного объема (например, 20, 50, 100 и 200 мм) разбавляют водно-ацетонитрильной смесью до объема 500 мм.

Стандартные растворы фумонизинов хранят при температуре около 4 °C, при этом срок их годности составляет не менее 6 мес.

     5 Аппаратура

При проведении испытания используют общеупотребительное лабораторное оборудование, в частности, перечисленное ниже.

5.1 Система для ВЭЖХ в указанной ниже комплектации:

5.1.1 Насос для подачи подвижной фазы изократический, пригодный для создания постоянной скорости потока 1 см/мин, оснащенный устройством ввода пробы (инжектором), обеспечивающим объем ввода 10 мм.

5.1.2 Колонка для ВЭЖХ аналитическая, заполненная обращенно-фазовым сорбентом, например, с привитыми октадецильными группами (ODS), обеспечивающая отделение пиков фумонизинов от сопутствующих пиков на уровне базовой линии, со следующими характеристиками: