ГОСТ 32152-2013 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы определения содержания янтарной, молочной и 3D-оксимасляной кислот
5 Определение массовой доли молочной, янтарной и бета-оксимасляной кислоты методом капиллярной газожидкостной хроматографии
5.1 Сущность метода заключается в экстрагировании карбоновых кислот из подкисленного водного экстракта пробы диэтиловым эфиром, получении производных кислот в виде их изопропиловых эфиров и разделении и количественном определении изопропиловых эфиров молочной, янтарной и бета-оксимасляной кислот с помощью газожидкостной хроматографии с использованием капиллярной колонки и внутреннего стандарта.
5.2 Метрологические характеристики метода
Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 3.
Таблица 3
Диапазон измерений массовой доли (содержания) в пересчете на сухое вещество, млн | Границы относительной погрешности | Предел повторяемости | Критическая разность ( |
Молочная кислота: | |||
от 20,0 до 400,0 включ. | 9 | 6 | 13 |
св. 400,0 | 7 | 5 | 10 |
Янтарная кислота: | |||
от 4,0 до 50,0 включ. | 11 | 8 | 16 |
св. 50,0 | 9 | 6 | 14 |
Бета-оксимасляная кислота: | |||
от 6,0 до 30,0 включ. | 12 | 10 | 17 |
св. 30,0 | 10 | 7 | 14 |
2)
, %5.3 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
Применяют средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы, указанные в 4.3, а также:
- хроматограф газовый по ГОСТ 26703 с пламенно-ионизационным детектором с пределом детектирования не более 2·10 г/с по гептану и инжектором с делением потока;
- капиллярную хроматографическую колонку длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм и толщиной фазы 0,25 мкм или аналогичную колонку с неподвижной фазой из сшитого полиэтиленгликоля.
5.4 Подготовка к проведению измерений
5.4.1 Подготовка к проведению измерений в части приготовления реактивов и экстракции анализируемых кислот из пробы проводится по 4.4, за исключением приготовления стандартных растворов ацетофенона, янтарной, молочной и бета-оксимасляной кислот, массовая концентрация которых должна быть в два раза меньше концентраций, указанных в 4.4.11-4.4.14 (при приготовлении стандартных растворов используют в два раза меньшие массы ацетофенона, янтарной кислоты, кальция молочнокислого и натриевой соли бета-оксимасляной кислоты, чем указано в 4.4.11-4.4.14): массовая концентрация приготовленных стандартных растворов: ацетофенона 4 г/дм, молочной кислоты 2,5 г/дм
(раствор
), янтарной кислоты 0,5 г/дм
(раствор
) и бета-оксимасляной кислоты 0,25 г/дм
.
5.4.2 Приготовление разбавленных градуировочных растворов, градуировочных смесей и получение изопропиловых эфиров молочной и янтарной кислот проводят в соответствии с 4.4.15, 4.4.16 с использованием стандартных растворов ацетофенона, янтарной и молочной кислот по 5.4.1. Массовая концентрация эквивалента молочной кислоты в приготовленных разбавленных стандартных растворах: 1,25 (раствор ); 1,0 г/дм
(раствор
); 0,75 (раствор
) и 0,25 г/дм
(раствор
). Массовая концентрация янтарной кислоты в разбавленных стандартных растворах: 2,5 (раствор
); 1,25 (раствор
) и 0,75 (раствор
) г/дм
. Составление градуировочных смесей молочной и янтарной кислот проводят в соответствии с таблицей 4.
Таблица 4 - Объемы растворов лактата кальция и янтарной кислоты для градуировки хроматографа
Номер комбинации | Лактат кальция | Янтарная кислота | ||||
Эквивалентное количество молочной кислоты в смеси, мг | Объем разбавленного стандартного раствора, взятый для приготовления смеси, см | Обозначение раствора | Количество янтарной кислоты в смеси, мг | Объем разбавленного стандартного раствора, взятый для приготовления смеси, см | Обозначение раствора | |
1 | 0,5 | 2 | 0,15 | 2 | ||
2 | 1,5 | 2 | 0,25 | 2 | ||
3 | 2 | 2 | 0,375 | 3 | ||
4 | 2,5 | 2 | 0,5 | 2 | ||
5 | 3,0 | 4 | 0,75 | 3 | ||
6 | 4,0 | 4 | 1,0 | 2 | ||
7 | 5,0 | 2 | 1,25 | 5 | ||
8 | 6,25 | 5 | 1,5 | 3 | ||
9 | 7,5 | 3 | 2,0 | 4 | ||
5.4.3 Приготовление изопропиловых эфиров бета-оксимасляной кислоты проводят по 4.4.17 с использованием стандартного раствора по 5.4.1. Масса бета-оксимасляной кислоты в отобранных по 4.4.17 для градуировки объемах стандартного раствора: 0,25; 1,0; 2,5 и 3,75 мг.
5.4.4 Подготовка хроматографа
Подготовку хроматографа проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации. Рекомендуются следующие режимы хроматографа:
температура испарителя 230 °С;
деление потока 1:30;
расход газа-носителя (азот) 1 см/мин;
объем вводимой пробы в хроматограф 1 мм;
программирование температуры колонки: нагрев от 50 °С до 130 °С со скоростью 8 °С/мин; нагрев от 130 °С до 200 °С со скоростью 3 °С/мин.
Температуру детектора, расход воздуха и водорода устанавливают в соответствии с инструкцией по эксплуатации хроматографа.
5.4.5 Градуировка хроматографа