Действующий

ГОСТ 32152-2013 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы определения содержания янтарной, молочной и 3D-оксимасляной кислот

     5 Определение массовой доли молочной, янтарной и бета-оксимасляной кислоты методом капиллярной газожидкостной хроматографии

5.1 Сущность метода заключается в экстрагировании карбоновых кислот из подкисленного водного экстракта пробы диэтиловым эфиром, получении производных кислот в виде их изопропиловых эфиров и разделении и количественном определении изопропиловых эфиров молочной, янтарной и бета-оксимасляной кислот с помощью газожидкостной хроматографии с использованием капиллярной колонки и внутреннего стандарта.

5.2 Метрологические характеристики метода

Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 3.


Таблица 3

Диапазон измерений массовой доли (содержания) в пересчете на сухое вещество, млн (мг/кг)

Границы относительной погрешности , %

Предел повторяемости , %

Критическая разность (2), %

Молочная кислота:

от 20,0 до 400,0 включ.

9

6

13

св. 400,0

7

5

10

Янтарная кислота:

от 4,0 до 50,0 включ.

11

8

16

св. 50,0

9

6

14

Бета-оксимасляная кислота:

от 6,0 до 30,0 включ.

12

10

17

св. 30,0

10

7

14



5.3 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

Применяют средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы, указанные в 4.3, а также:

- хроматограф газовый по ГОСТ 26703 с пламенно-ионизационным детектором с пределом детектирования не более 2·10 г/с по гептану и инжектором с делением потока;

- капиллярную хроматографическую колонку длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм и толщиной фазы 0,25 мкм или аналогичную колонку с неподвижной фазой из сшитого полиэтиленгликоля.

5.4 Подготовка к проведению измерений

5.4.1 Подготовка к проведению измерений в части приготовления реактивов и экстракции анализируемых кислот из пробы проводится по 4.4, за исключением приготовления стандартных растворов ацетофенона, янтарной, молочной и бета-оксимасляной кислот, массовая концентрация которых должна быть в два раза меньше концентраций, указанных в 4.4.11-4.4.14 (при приготовлении стандартных растворов используют в два раза меньшие массы ацетофенона, янтарной кислоты, кальция молочнокислого и натриевой соли бета-оксимасляной кислоты, чем указано в 4.4.11-4.4.14): массовая концентрация приготовленных стандартных растворов: ацетофенона 4 г/дм, молочной кислоты 2,5 г/дм (раствор ), янтарной кислоты 0,5 г/дм (раствор ) и бета-оксимасляной кислоты 0,25 г/дм.

5.4.2 Приготовление разбавленных градуировочных растворов, градуировочных смесей и получение изопропиловых эфиров молочной и янтарной кислот проводят в соответствии с 4.4.15, 4.4.16 с использованием стандартных растворов ацетофенона, янтарной и молочной кислот по 5.4.1. Массовая концентрация эквивалента молочной кислоты в приготовленных разбавленных стандартных растворах: 1,25 (раствор ); 1,0 г/дм (раствор ); 0,75 (раствор ) и 0,25 г/дм (раствор ). Массовая концентрация янтарной кислоты в разбавленных стандартных растворах: 2,5 (раствор ); 1,25 (раствор ) и 0,75 (раствор ) г/дм. Составление градуировочных смесей молочной и янтарной кислот проводят в соответствии с таблицей 4.


Таблица 4 - Объемы растворов лактата кальция и янтарной кислоты для градуировки хроматографа

Номер комбинации

Лактат кальция

Янтарная кислота


Эквивалентное количество молочной кислоты в смеси, мг

Объем разбавленного стандартного раствора, взятый для приготовления смеси, см

Обозначение раствора

Количество янтарной кислоты в смеси, мг

Объем разбавленного стандартного раствора, взятый для приготовления смеси, см

Обозначение раствора

1

0,5

2


0,15

2

2

1,5

2


0,25

2

3

2

2


0,375

3

4

2,5

2


0,5

2

5

3,0

4


0,75

3

6

4,0

4


1,0

2

7

5,0

2


1,25

5

8

6,25

5


1,5

3

9

7,5

3


2,0

4



5.4.3 Приготовление изопропиловых эфиров бета-оксимасляной кислоты проводят по 4.4.17 с использованием стандартного раствора по 5.4.1. Масса бета-оксимасляной кислоты в отобранных по 4.4.17 для градуировки объемах стандартного раствора: 0,25; 1,0; 2,5 и 3,75 мг.

5.4.4 Подготовка хроматографа

Подготовку хроматографа проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации. Рекомендуются следующие режимы хроматографа:

температура испарителя 230 °С;

деление потока 1:30;

расход газа-носителя (азот) 1 см/мин;

объем вводимой пробы в хроматограф 1 мм;

программирование температуры колонки: нагрев от 50 °С до 130 °С со скоростью 8 °С/мин; нагрев от 130 °С до 200 °С со скоростью 3 °С/мин.

Температуру детектора, расход воздуха и водорода устанавливают в соответствии с инструкцией по эксплуатации хроматографа.

5.4.5 Градуировка хроматографа