ГОСТ EN 15851-2013

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ


Продукты пищевые

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АФЛАТОКСИНА В ПРОДУКТАХ НА ЗЕРНОВОЙ ОСНОВЕ ДЛЯ ПИТАНИЯ ГРУДНЫХ ДЕТЕЙ И ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА

Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и флуориметрическим детектированием

Foodstuffs. Determination of aflatoxin in cereal based foods for infants and young children. HPLC method with immunoaffinity column cleanup and fluorescence detection

МКС 67.050

         67.060

Дата введения 2014-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") при участии специалистов Государственного научного учреждения "Всероссийский научно-исследовательский институт консервной и овощесушильной промышленности" Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ "ВНИИКОП" Россельхозакадемии) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии европейского стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 335)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 28 августа 2013 г. N 58-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 октября 2013 г. N 1170-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 15851-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2014 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту ЕN 15851:2010* "Продукты пищевые. Определение афлатоксина в продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и флуориметрическим детектированием" ("Foodstuffs - Determination of aflatoxin in cereal based foods for infants and young children - HPLC method with immunoaffinity column cleanup and fluorescence detection", IDT)

________________     

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Ноябрь 2019 г.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения афлатоксина в продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением очистки экстракта на колонке с иммуноаффинным сорбентом и флуориметрическим детектированием. Метод прошел валидацию путем межлабораторных испытаний проб, загрязненных афлатоксином естественным и искусственным образом, в диапазоне содержания от 0,07 до 0,18 мкг/кг. Подробная информация о валидации метода приведена в разделе 9 и приложении B.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения).     

EN ISO 3696:1995, Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)     

     3 Сущность метода

Анализируемую пробу экстрагируют смесью метанола и воды. Экстракт фильтруют, разбавляют фосфатно-хлоридным буферным раствором и пропускают через колонку с иммуноаффинным сорбентом, содержащим антитела, специфичные к афлатоксину , при этом происходят очистка экстракта и концентрирование афлатоксина . Афлатоксин элюируют с колонки метанолом и определяют с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с применением послеколоночной дериватизации методом бромирования и детектированием по флуоресценции.

Послеколоночную дериватизацию осуществляют с использованием брома, полученного электрохимическим путем или с помощью бромида-пербромида пиридиния.

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696:1995. Используемые растворители по степени чистоты должны быть пригодны для применения в анализе с помощью ВЭЖХ. Допускается использование готовых растворов, доступных для приобретения, при условии что их характеристики не отличаются от приведенных ниже.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Утилизацию отработанных растворителей проводят в соответствии с требованиями законодательства по охране окружающей среды. Способы обезвреживания отработанных реактивов приведены в материалах Международного агентства по исследованию рака (IARC) [1].

4.2 Гелий газообразный очищенный сжатый.

4.3 Азот.

4.4 Натрий фосфорнокислый двухзамещенный безводный () или гидратированный (·12).

4.5 Калий бромистый.

4.6 Калий хлористый.

4.7 Калий фосфорнокислый однозамещенный.

4.8 Натрий хлористый.

4.9 Натрия гидроксид.

4.10 Кислота соляная, водный раствор массовой долей w(HCI)=37%.

4.11 Кислота соляная, раствор молярной концентрации c(HCI)=0,1 моль/дм

Раствор готовят разбавлением 8,28 см раствора соляной кислоты по 4.10 водой до 1 дм.

4.12 Натрия гидроксид, раствор молярной концентрации c(NaOH)=0,1 моль/дм

Растворяют 4 г гидроксида натрия по 4.9 в 1 дм воды.

4.13 Раствор фосфатно-хлоридный буферный молярной концентрации натрия хлористого c(NaCI)=120 ммоль/дм, хлористого калия c(KCI)=2,7 ммоль/дм, суммы натрия фосфорнокислого и калия фосфорнокислого c()=10 ммоль/дм, рН=7,4

Растворяют 8,0 г натрия хлористого по 4.8, 1,2 г безводного двухзамещенного фосфорнокислого натрия [или 2,9 г гидратированного двухзамещенного фосфорнокислого натрия (·12)] по 4.4, 0,2 г однозамещенного фосфорнокислого калия по 4.7 и 0,2 г хлористого калия по 4.6 в 900 см воды.

Значение рН приготовленного раствора доводят до 7,4 ед. рН путем добавления раствора соляной кислоты по 4.11, либо раствора гидроксида натрия по 4.12, после чего объем раствора доводят водой до 1 дм. В качестве альтернативы допускается использовать доступный для приобретения таблетированный препарат или готовый раствор с аналогичными характеристиками.

4.14 Пиридиния бромид-пербромид (CAS 39416-48-3).

4.15 Ацетонитрил.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Ацетонитрил является токсичным веществом, поэтому все операции по приготовлению растворов, содержащих ацетонитрил, следует проводить в вытяжном шкафу с использованием взрывобезопасного перемешивающего устройства. Фильтрование растворов, содержащих ацетонитрил, следует проводить также в вытяжном шкафу.

4.16 Метанол для ВЭЖХ.

4.17 Метанол технический.

4.18 Толуол.

4.19 Экстрагент

Смешивают 8 объемных частей метанола по 4.17 с двумя объемными частями воды.

4.20 Кислота азотная, раствор молярной концентрации (HNО)=4 моль/дм.

4.21 Подвижная фаза А для использования при послеколоночной дериватизации бромидом-пербромидом пиридиния

Смешивают шесть объемных частей воды с двумя объемными частями ацетонитрила по 4.15 и тремя объемными частями метанола по 4.16. Перед использованием подвижную фазу дегазируют, например с помощью гелия, по 4.2.

4.22 Подвижная фаза В для использования при послеколоночной дериватизации бромом, полученным электрохимическим путем

Смешивают шесть объемных частей воды с двумя объемными частями ацетонитрила по 4.15 и тремя объемными частями метанола по 4.16. Добавляют из расчета на 1 дм подвижной фазы по 120 мг бромистого калия по 4.5 и по 350 мм азотной кислоты по 4.20. Перед использованием подвижную фазу дегазируют, например с помощью гелия, по 4.2.

4.23 Реактив для послеколоночной дериватизации

Растворяют 50 мг бромида-пербромида пиридиния по 4.14 в 1 дм воды. Реактив используют в сочетании с подвижной фазой А по 4.21. Срок годности раствора - четыре дня при хранении в темном месте при комнатной температуре.

4.24 Смесь толуола и ацетонитрила

Смешивают девять объемных частей толуола по 4.18 с одной объемной частью ацетонитрила по 4.15.

4.25 Колонка с иммуноаффинным сорбентом

Для проведения испытания пригодна колонка с иммуноаффинным сорбентом с иммобилизованными антителами, специфичными в отношении афлатоксина , имеющая сорбционную емкость по отношению к афлатоксину не менее 100 нг и обеспечивающая полноту обнаружения не менее 80% при внесении в нее 5 нг афлатоксина в растворе, состоящем из 10 объемных частей метанола и 90 объемных частей воды.