ГОСТ Р ИСО 23275-2-2013 Жиры и масла животные и растительные. Эквиваленты масла какао в масле какао и шоколаде. Часть 2. Определение количества эквивалентов масла какао

     8 Методика определения

8.1 Экстрагирование жиров

8.1.1 Выделяют жир и определяют его содержание в пробе шоколада (приготовленного по 7.2) путем экстрагирования при помощи аппарата Сокслета [4], как указано ниже.

В колбу вместимостью от 300 до 500 см взвешивают от 4 до 5 г шоколада. Медленно при помешивании добавляют 45 см кипящей воды для получения гомогенной суспензии. Добавляют 55 см (см. 4.3) и немного обезжиренного средства (стеклянные шарики, деревянная стружка и др.) для предотвращения интенсивного кипения и перемешивают. Накрывают часовым стеклом, медленно доводят раствор до кипения и кипятят в течение 15 мин. Часовое стекло промывают 100 см воды. Фильтруют раствор через бумажный фильтр средней плотности (см. 4.4) или аналогичный, три раза промывая колбу водой. Продолжают промывание до тех пор, пока последняя порция фильтрата не будет содержать ионов хлора. Помещают фильтр с образцом в обезжиренную экстракционную гильзу и сушат в течение 2 ч в маленькой колбе при температуре 100 °С. Колбу закрывают тампоном из стекловаты.

В колбу Эрленмейера вместимостью 250 см помещают немного обезжиренного средства (стеклянные шарики, деревянная стружка и др.) для предотвращения интенсивного кипения и сушат в течение 1 ч при температуре 100 °С. Охлаждают колбу до комнатной температуры в эксикаторе, затем взвешивают ее. Помещают экстракционную гильзу с высушенной пробой в аппарат Сокслета (см. 5.9), закрепив ее при помощи спиральных или стеклянных держателей. Промывают колбы, использованные для гидролиза и сушки, а также часовое стекло тремя порциями петролейного эфира по 50 см, добавляют смыв в экстракционную гильзу. Гидролизованную пробу подвергают экстракции в течение 4 ч, корректируя температуру таким образом, чтобы провести более 30 циклов экстракции.

Снимают колбу и выпаривают растворитель. Сушат колбу при температуре 102 °С до постоянной массы (1,5 ч). Охлаждают колбу в эксикаторе до комнатной температуры, затем взвешивают ее. Массу считают постоянной, если в последовательных периодах сушки по одному часу потеря жира составляет менее 0,05%. Расхождения между параллельными определениями жира должны быть в пределах 0,10%.

Общее содержание жира в шоколаде , выраженное в г/100 г, вычисляют по формуле

,                                                            (1)

где - общее количество жира, полученное при экстракции, г;

- масса анализируемой пробы шоколада, г.

Могут использоваться альтернативные процедуры экстрагирования (например, ускоренное экстрагирование растворителем, сверхкритическим углекислым газом или микроволновая экстракция) при условии, что получаются идентичные результаты.

Вычисления проводят до третьего десятичного знака. Результат округляют до второго десятичного знака.

8.2 Разделение триацилглицеридов методом газовой хроматографии высокого разрешения

Анализируемые пробы [масло какао; жир, экстрагированный из шоколада; ССМ масла какао (см. 4.1)] подогревают в сушильном шкафу (см. 5.2) до полного расплавления. Если жидкая проба содержит осадок, то пробу фильтруют внутри шкафа для получения прозрачного фильтрата. Пипетки, используемые для переноса пробы в процессе взвешивания, нагревают примерно до температуры 55 °С в сушильном шкафу (см. 5.2), чтобы избежать частичного фракционирования жиров.

Взвешивают около 0,2 г анализируемой пробы, помещают в мерную колбу вместимостью 20 см (см. 5.4), доводят до отметки подходящим растворителем для жиров (см. 4.2). 1 см полученного раствора переносят пипеткой (см. 5.5) в другую мерную колбу вместимостью 20 см и доводят до метки тем же растворителем.

Вводят 0,5-1,0 мм конечного анализируемого раствора (концентрация анализируемой пробы 0,5 мг/см) в хроматографическую систему высокого разрешения, используя холодную встроенную инжекционную систему.

Могут использоваться альтернативные значения объема и концентрации пробы, а также инжекторы (распылители) при условии, что система детектирования дает линейную зависимость и удовлетворяются требования пригодности системы (см. 10.2).

8.3 Идентификация

Идентификацию пяти основных триацилглицеридов [1,3-дипалмитоил-2-олеоилглицерид POP), 1-палмитоил-2-олеоил-3-стеароилглицерид (POS), 1-пальмитоил-2,3-диолеоилглицерид (POO), 1,3-дистеароил-2-олеоилглицерид (SOS) и 1-стеароил-2,3-диолеоилглицерид (SOO)] анализируемой пробы осуществляют путем сравнения их времени удерживания со временем удерживания триацилглицеридов CCM масла какао (см. 4.1). В целом триацилглицериды появляются в порядке возрастания числа атомов углерода и увеличения ненасыщенности для одного и того же числа атомов углерода. Порядок элюирования триацилглицеридов для CCM масла какао показан в приведенной для примера хроматограмме (см. рисунок A.1, приложение A).