ГОСТ 31926-2013 Средства лекарственные для ветеринарного применения. Методы определения безвредности (с Изменением N 1)

     10 Определение полноты инактивации (остаточной токсичности и вирулентности) вакцин на лабораторных животных или культуре клеток

Полноту инактивации (остаточную токсичность и вирулентность) проверяют в лекарственных средствах, содержащих инактивированный возбудитель. Для вирусвакцин, предназначенных для использования в птицеводстве, испытания проводят на эмбрионах кур, уток и культуре клеток куриных фибробластов, антирабические вакцины проверяют на белых мышах.

Полнота инактивации бактерийных вакцин характеризуется показателем стерильности, определяемой по ГОСТ 28085, и безвредности для целевых животных, включая птиц, и/или экспериментально-биологических моделей (мышей, морских свинок и кроликов).

В зависимости от типа возбудителя болезней у птицы проводят следующие испытания:

- При определении содержания живых орто- и парамиксовирусов (ньюкаслская болезнь, грипп птиц) вакцину вводят в аллантоисную полость куриных эмбрионов и исследуют экстраэмбриональную жидкость (ЭЭЖ) от зараженных куриных и утиных эмбрионов в капельной реакции агглютинации (РГА) с 5%-ной суспензией эритроцитов петуха. При положительной РГА проводят повторный пассаж на удвоенном количестве эмбрионов. При подтверждении положительного результата РГА серию лекарственного средства бракуют.

- При определении содержания живого коронавируса (инфекционный бронхит кур) проводят два последовательных пассажа вакцины на эмбрионах кур путем заражения их в аллантоисную оболочку. По окончании срока инкубации эмбрионы асептически вскрывают и учитывают патологоанатомические изменения (отставание в росте, "карликовость", свертывание эмбриона в шар).

- При обнаружении характерных изменений у эмбрионов первого пассажа проводят повторный пассаж вакцины на удвоенном количестве эмбрионов. Если изменения у эмбрионов обнаруживаются вновь, серию лекарственного средства бракуют.

- При определении содержания бирнавиридов (инфекционная бурсальная болезнь) проводят два последовательных пассажа на эмбрионах СПФ кур путем их заражения на хориоаллантоисную оболочку в области искусственной пуги путем внесения вакцины через искусственную воздушную камеру. По окончании срока инкубации оставшиеся живыми эмбрионы вскрывают, учитывая поражения (отечность головы и подчелюстного пространства, кровоизлияния в мышцах, изменения печени, отставание в росте). Объединенную пробу от эмбрионов первого пассажа используют для проведения второго заключительного пассажа, который выполняется аналогично.

- При определении содержания живого вируса ССЯ-76 проводят два последовательных пассажа вакцины на эмбрионах уток с последующей постановкой РГА. Экстраэмбриональную жидкость, собранную отдельно от каждого эмбриона второго пассажа, проверяют на гемагглютинирующую активность в капельной реакции РГА с 5%-ной суспензией эритроцитов петуха. При положительной РГА проводят повторный пассаж на удвоенном количестве эмбрионов. При подтверждении положительного результата РГА серию лекарственного средства бракуют.

- При определении метапневмовирусов проводят три последовательных пассажа на первичной культуре клеток куриных фибробластов (REO) или VERO. Если после второго пассажа на культуре клеток куриных фибробластов присутствует цитопатогенное действие, характерное для реовируса или метапневмовируса птиц, серию лекарственного средства бракуют.

- При испытании на наличие активного вируса в антирабических вакцинах вакцину вводят мышам в мозг. Наблюдение за животными проводят в течение 21 сут. Вирус бешенства в вакцине считают инактивированным, если мыши остаются живыми. При заболевании хотя бы одной мыши с клиническими признаками бешенства серию вакцины бракуют. Мозг погибших мышей исследуют методом иммунофлуоресценции. В мазках из мозга мышей вирус бешенства обнаруживаться не должен.

(Измененная редакция, Изм. N 1).