ГОСТ ISO 10727-2013 Чай и чай растворимый. Определение содержания кофеина. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (Издание с Поправкой)

     4 Реактивы

Применяют реактивы подтвержденного аналитического качества.

4.1 Вода дистиллированная в соответствии с ISO 3696.

4.2 Метанол класса для ВЭЖХ.

4.3 Подвижная фаза, водный раствор метанола

Вносят 600 см метанола (см. 4.2) в мерную колбу вместимостью 2 дм. Добавляют дистиллированную воду до метки. Перемешивают и фильтруют раствор через фильтр с размером пор 0,45 мкм (см. 5.3).

Регулируя концентрацию метанола, можно изменять время удерживания кофеина с целью оптимизации хроматографического разделения. Той же цели можно достигнуть путем увеличения температуры колонки, но не выше 60°С.

4.4 Этанол, 25% (об.) водный раствор.

4.5 Магния оксид (так называемый "тяжелый оксид магния").

Примечание - Использование легкого оксида магния может привести к ошибкам в определении кофеина.

4.6 Кофеин, исходный раствор массовой концентрации 500 мкг/см

Взвешивают 0,125 г кофеина с точностью ±0,001 г в мерную колбу вместимостью 250 см. Добавляют достаточное количество водного раствора этанола (см. 4.4) - примерно до половины объема колбы. Перемешивают до полного растворения кофеина и добавляют водный раствор этанола до метки.

Раствор можно использовать в течение месяца при хранении в холодильнике.

4.7 Кофеин, стандартные растворы

Стандартные растворы кофеина А, В, С и D готовят в день использования.

4.7.1 Кофеин, стандартный раствор А массовой концентрации 15 мкг/см

Используют исходный раствор (см. 4.6), имеющий комнатную температуру. С помощью пипетки помещают 3,0 см этого раствора в мерную колбу объемом 100 см. Добавляют дистиллированную воду до метки и перемешивают.

4.7.2 Кофеин, стандартный раствор В массовой концентрации 10 мкг/см

Следуют процедуре, приведенной в 4.7.1, но отбирают пипеткой 2,0 см исходного раствора кофеина (см. 4.6).

4.7.3 Кофеин, стандартный раствор С массовой концентрации 5 мкг/см

Следуют процедуре, приведенной в 4.7.1, но отбирают пипеткой 1,0 см исходного раствора кофеина (см. 4.6).

4.7.4 Кофеин, стандартный раствор D массовой концентрации 2 мкг/см

С помощью пипетки переносят 20 см стандартного раствора кофеина В (см. 4.7.2) в мерную колбу объемом 100 см. Добавляют дистиллированную воду до метки и перемешивают.