ГОСТ ISO 10993-4-2011 Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 4. Исследования изделий, взаимодействующих с кровью
6.2 Методы исследования
6.2.1 Методы, рекомендуемые для изучения взаимодействия изделий и материалов с кровью
Рекомендуемые методы исследования сгруппированы на основе категорий изделий. Перечни методов приведены в таблицах 3 и 4.
Исследования классифицированы по пяти категориям, основанным на изучаемом процессе или системе:
a) тромбоз (см. 3.3),
b) коагуляция (см. 3.4),
c) тромбоциты и их функции (см. 3.5),
d) гематология (см. 3.6),
e) иммунология (см. 3.7).
Принципы и научная основа методов исследования изложены в приложении В.
Таблица 3 - Методы исследования изделий, присоединяемых извне
Тест | Метод | Комментарии |
Тромбоз | Световая микроскопия (адгезия тромбоцитов, лейкоциты, агрегаты, эритроциты, фибрин и др.) | - |
Процент окклюзии; сокращение потока; гравиметрический анализ (масса тромбов); световая микроскопия (адгезия тромбоцитов, лейкоциты, скопления клеток, эритроциты, фибрин и т.д.); снижение давления через устройство, меченые антитела к тромботическим компонентам | ||
СЭМ (адгезия и агрегация тромбоцитов, морфология тромбоцитов и лейкоцитов; фибрин) | ||
Коагуляция | ЧТВ (неактивированное) | - |
Исследование специфических коагуляционных факторов; ФПА, D-димер, | ||
Тромбоциты | Подсчет тромбоцитов; агрегация тромбоцитов; время кровотечения | Рекомендуется для изделий длительного (от 24 ч до 30 сут) и постоянного контакта (более 30 сут) |
ТФ-4, | ||
Гематология | Число лейкоцитов, дифференциальный анализ лейкоцитов; гемолиз (количество свободного гемоглобина в плазме) | - |
Подсчет ретикулоцитов; активация высвобождения специфических продуктов из клеток периферической крови (гранулоциты) | ||
Система комплемента | СЗа, С5а, ТСС, C4d, Bb, iC3b, SC5b-9, CH50, С3 конвертаза, С5 конвертаза | - |
Таблица 4 - Методы исследования имплантируемых изделий
Тест | Метод | Комментарии |
Тромбоз | Процент окклюзии; сокращение потока; вскрытие изделия (макро- и микроскопия); аутопсия дистальных органов (макро- и микроскопия) | - |
СЭМ, ангиография | ||
Коагуляция | ЧТВ (неактивированное), ПВ; ТВ; плазменный фибриноген, ПДФ | - |
Исследование специфических факторов свертывания крови; ФПА, D-димер, | ||
Тромбоциты | Подсчет тромбоцитов; агрегация тромбоцитов | - |
Исследование меченых | ||
Гематология | Число лейкоцитов, дифференциальный подсчет лейкоцитов; гемолиз (количество свободного гемоглобина в плазме) | - |
Подсчет ретикулоцитов; активация высвобождения специфических продуктов из клеток периферической крови (гранулоциты) | ||
Система комплемента | СЗа, С5а, ТСС, C4d, Bb, iC3b, SC5b-9, CH50, С3 конвертаза, С5 конвертаза | - |
6.2.2 Изделия, не контактирующие с организмом человека
Изделия, не контактирующие с организмом человека, не подвергают исследованию их взаимодействия с кровью. Одноразовые наборы для теста проверяют с целью исключения влияния материалов, из которых они изготовлены, на результаты исследований.
6.2.3 Изделия, контактирующие извне
После использования таблиц 1 и 2 для определения соответствующей категории изделия по отношению к контакту с кровью следует использовать таблицу 3 для подбора соответствующих методов тестирования взаимодействия с кровью (см. также 6.1.6).
6.2.4 Имплантируемые изделия
После использования таблиц 1 и 2 для определения соответствующей категории изделия по отношению к контакту с кровью следует использовать таблицу 4 для подбора соответствующих методов тестирования взаимодействия с кровью (см. также 6.1.6). Выбор метода зависит также от специфических особенностей исследуемого изделия.
6.2.5 Указания и ограничения
РИА используют для изучения взаимодействия изделия с кровью человека, но, как правило, он не пригоден для крови животных. Наборы, предназначенные для исследований с использованием человеческой крови, обычно не дают реакции с кровью животных, за исключением крови некоторых приматов. При разработке тест-систем следует убедиться в том, что тест-система действительно измеряет активацию, вызванную исследуемым материалом, а не является артефактом, присущим тест-системе. Кроме того, уровни анализируемых веществ, получаемых при моделировании in vitro и ex vivo с использованием крови человека, нередко требуют соответствующего (иногда довольно значительного) разведения для получения надежных результатов с применением соответствующих методов анализа, например, радиоиммунологических методов. Следует убедиться, что в рассмотрение были приняты только результаты анализов, измеренных в пределах диапазона концентраций, обеспечивающих надежность использованного метода. Следует также убедиться, что был измерен диапазон разведений исследуемого образца.
При исследовании взаимодействия изделия с кровью может возникнуть разброс в полученных результатах из-за неправильного обращения с кровью либо неадекватно прогнозируемого воздействия материала до начала исследования, например, когда исследование ограничивают тестами одного типа или допускают попадание постороннего материала, не относящегося к испытуемому материалу или изделию. Материалы, которые предполагают применять в условиях медленного (венозного) потока крови, могут взаимодействовать с потоком совсем иначе, когда их используют с потоком с высокой скоростью (артериальная кровь). Изменение конструкции и (или) условий потока могут изменять гемосовместимость материала in vivo.