ГОСТ Р ИСО 17735-2012 Воздух рабочей зоны. Определение суммарного содержания изоцианатных групп в воздухе методом жидкостной хроматографии с использованием в качестве реагента 1-(9-антраценилметил)пиперазина (МАР)

     4.4 Подвижная фаза в высокоэффективной жидкостной хроматографии

При анализе методом ВЭЖХ применяют градиентный режим элюирования с изменением рН. Слабые и сильные подвижные фазы имеют одинаковые соотношения вода/органическая фаза. Они отличаются только значением рН водной фазы. Интенсивность флуоресценции МАР-производных сильно зависит от рН подвижной фазы. Поэтому в подвижную фазу после выхода ее из аналитической колонки и перед попаданием в блок детекторов добавляют кислый раствор для обеспечения независимости флуоресцентного сигнала от рН подвижной фазы.

4.4.1 Буферные растворы для подвижной фазы

К 3840 мл воды добавляют 46,1 г фосфорной кислоты с массовой долей основного вещества 86% (приблизительно 27 мл, 0,4 моль) и 15,1 мл муравьиной кислоты с массовой долей основного вещества 96% (0,4 моль). Начальное значение рН должно быть приблизительно равно 1,6. Добавляют к этому раствору триэтиламин (с массовой долей основного вещества 99,5%) аликвотами объемом 10 мл, перемешивая после добавления каждой из них до тех пор, пока не будет добавлен весь объем (117 мл) триэтиламина. Значение рН раствора должно быть равно 6,0. При необходимости доводят рН раствора до 6,0, добавляя дополнительное количество триэтиламина. Делят этот раствор на две порции, объемом по 2 л. К одной из полученных порций раствора добавляют 33,5 мл концентрированной соляной кислоты. Тщательно перемешивают. Конечное значение рН раствора должно составлять 1,6. Ко второй части раствора добавляют 33,5 мл воды. По этой методике получают буферные растворы концентрацией фосфорной и муравьиной кислот 0,1 моль/л, со значениями рН, приблизительно равными 1,6 и 6,0, соответственно. Опыт показывает, что буферные растворы стабильны в течение шести месяцев при их хранении в холодильнике.

4.4.2 Первичные подвижные фазы

Слабую подвижную фазу (А) получают смешиванием ацетонитрила с буферным раствором с рН 6,0 с отношением по объему 65/35. Сильную подвижную фазу (В) получают смешиванием ацетонитрила с буферным раствором с рН 1,6, с отношением по объему 65/35. Подвижные фазы фильтруют через нейлоновые фильтры с номинальной тонкостью фильтрации 0,45 мкм. Перед использованием подвижную фазу дегазируют либо с помощью вакуумного дегазирования, либо с помощью гелиевого барботирования. Как показывает опыт, основная первичная подвижная фаза стабильна в течение шести месяцев при обеспечении предотвращения испарения.

4.4.3 Послеколоночная кислая подвижная фаза

Разбавляют водой 35 мл раствора фосфорной кислоты с массовой долей основного вещества 85% для получения конечного раствора объемом 350 мл. Смешивают этот раствор с 650 мл ацетонитрила. Фильтруют этот раствор через нейлоновый фильтр с номинальной тонкостью фильтрации 0,45 мкм. Дегазируют подвижную фазу перед использованием либо с помощью вакуумирования (вакуумного дегазирования), либо с помощью гелиевого барботирования. Опыт показывает, что кислая подвижная фаза сохраняет стабильность в течение шести месяцев, если не будет происходить испарения.