4.1 Хроматограф для ВЭЖХ. Хроматографическая система для ВЭЖХ, состоящая из насоса, ручного или автоматического инжектора, спектрофотометрического детектора с возможностью регистрации фракций в ультрафиолетовой области спектра, интегратора или программно-аппаратного комплекса для обработки результатов хроматографического разделения.
Для проведения определения на хроматографе ВЭЖХ используют следующие режимы:
- скорость потока 1,0 см/мин;
- объем пробы 20 мкл (40 мкл в случае разбавления пробы перед определением);
- регистрация фракций спектрофотометрическим способом при длине волны 280 нм на детекторе с разрешением не хуже 0,05 ед. оптической плотности;
- термостатируемые условия хроматографического определения для обеспечения температурного интервала от 25 до 30 °С.
4.2 Колонка аналитическая. Для хроматографического разделения используют аналитическую колонку, содержащую адсорбент с иммобилизованным кварцевым наполнителем с высокой степенью очистки и низким уровнем металлических примесей.
Новая аналитическая колонка должна иметь следующие характеристики:
- эффективность колонки (), рассчитываемая по формуле (1), равна для нарингина 2000:
, (1)
где - время удерживания пика, с;
- ширина пика на половине высоты, с.
Разрешение колонки для двух пиков () нарингина и гесперидина составляет 1,5. Расчет значения разрешения колонки проводят по формуле
. (2)
Показатель симметричности пиков () для гесперидина принимает значения от 0,9 до 1,4. Расчет симметричности пиков проводят по формуле
, (3)
где - ширина пика слева от перпендикуляра на 10% высоты пика, с;