ГОСТ 31506-2012 Молоко и молочные продукты. Определение наличия жиров немолочного происхождения (с Изменением N 1) (с Поправкой)

     9 Проведение измерений

9.1 В коническую колбу вместимостью 500 см помещают от 100 мг до 15 г жира, выделенного в соответствии с требованиями раздела 7, добавляют 10 см раствора гидроокиси калия с массовой долей 40% и 20 см этилового спирта.

Присоединяют к колбе воздушный холодильник и нагревают смесь на водяной бане до получения прозрачного раствора. Затем продолжают нагревание еще 30 мин или 1 ч.

9.2 Добавляют 60 см дистиллированной воды, затем 180 см этилового спирта, нагревают смесь на водяной бане до 40°С. Добавляют 30 см спиртового раствора дигитонина массовой концентрации 10 г/дм, перемешивают вращательными движениями и охлаждают при температуре 5°С в течение 12 ч.

9.3 Собирают выделившийся дигитонин стерина, пропуская полученный раствор через фильтрующую воронку с диаметром пор 80 мкм и фильтровальную бумагу.

Промывают осадок на фильтре водой температурой 5°С до прекращения пенообразования, затем промывают последовательно с 25-50 см этилового спирта и с 25-50 см диэтилового эфира.

9.4 Полученный осадок вместе с фильтровальной бумагой помещают в сушильный шкаф и высушивают при температуре (102±2)°С в течение 10-15 мин. Сухой остаток на фильтре является дигитонином стерина.

9.5 В коническую колбу вместимостью 25 см помещают (100±5) мг дигитонина стерина, добавляют 1 см уксусного ангидрида, нагревают на глицериновой бане при температуре 130°С-145°С до растворения дигитонина, после чего нагревание продолжают еще 2 мин. Затем раствор охлаждают до 80°С.

Не используют прямой нагрев раствора, так как возможно разбрызгивание.

9.6 К охлажденному до 80°С раствору (9.5) добавляют 4 см этилового спирта, перемешивают, слегка нагревают для растворения стерил ацетата, который может кристаллизоваться.

9.7 Теплый раствор фильтруют через бумажный фильтр средней фильтрации, промывая этиловым спиртом. Полученный фильтрат постепенно нагревают до слабого кипения. В кипящий раствор аккуратно по каплям из пипетки с одновременным энергичным встряхиванием добавляют 1,0-1,5 см дистиллированной воды до такого состояния, пока стерил ацетат не начнет выпадать в осадок, но при этом еще возвращаясь в раствор (до насыщенного раствора). В образующийся осадок стерил ацетата добавляют несколько капель этилового спирта. Охлаждают на воздухе 2 ч и затем окончательно в холодной воде 30 мин.

9.8 Выделившийся стерил ацетат фильтруют через фильтровальную бумагу высокой фильтрации, применяя фильтрующее устройство (колба Бунзена и воронка Бюхнера) с водоструйным насосом, и промывают кристаллы 1 см этилового спирта (80% об.).

9.9 Выделившиеся кристаллы для повторного растворения нагревают с 1 см этилового спирта. Охлаждают 15 мин на воздухе, затем 5 мин в холодной воде. Выкристаллизовавшийся стерил ацетат фильтруют по 9.8.

9.10 При необходимости (для лучшей очистки) рекристаллизацию и фильтрацию повторяют 3-4 раза.

9.11 В коническую колбу вместимостью 25 см помещают 10 мг стерил ацетата, добавляют 1 смэтилового спирта, аккуратно перемешивают и добавляют 1-2 капли раствора гидроокиси калия с массовой долей 40%.

9.12 Раствор нагревают на кипящей водяной бане до начала закипания и растворения стерил ацетата.

9.13 Добавляют 10 см дистиллированной воды. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 см, добавляют 25 см диэтилового эфира и встряхивают. После разделения смеси водный слой удаляют.

9.14 Оставшийся слой промывают тремя порциями по 5 см дистиллированной воды. Затем переносят в коническую колбу вместимостью 50 см и выпаривают насухо.

9.15 Остаток растворяют в 10 см этанола (80% об.). Каплю раствора помещают на предметное стекло для микроскопии, равномерно распределяя ее по поверхности, закрывают покровным стеклом, выдерживают до начала кристаллообразования по краям предметного стекла, переворачивают и смотрят под микроскопом по мере кристаллизации при линейном увеличении в 200 раз. Формы кристаллов стеринов оценивают визуально, сравнивая их со сравнительным образцом.

Формы сравнительных образцов представлены в приложении А.

Раздел 9 (Измененная редакция, Изм. N 1).