ГОСТ 31504-2012 Молоко и молочная продукция. Определение содержания консервантов и красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (Издание с Поправкой)

     8 Определение массовой доли консервантов

8.1 Подготовка к проведению определения

8.1.1 Приготовление экстрагирующего раствора

Готовят водный раствор ацетата аммония массовой концентрации 0,8 г/дм. В мерную колбу вместимостью 1000 дм помещают (0,800±0,001) г ацетата аммония, растворяют в небольшом количестве бидистиллированной воды. Объем раствора доводят бидистиллированной водой до метки, затем кислотность раствора доводят до 4,2-4,3 ед. рН, добавляя по каплям "ледяную" уксусную кислоту.

Полученный раствор смешивают с ацетонитрилом в соотношении 3:2 (по объему).

Срок хранения раствора в плотно укупоренной посуде - не более 7 сут.

8.1.2 Приготовление подвижной фазы для жидкостной хроматографии

Раствор ацетата аммония массовой концентрации 0,8 г/дм, приготовленный по 8.1.1, смешивают с ацетонитрилом в соотношении 65:35. Указанное соотношение является примерным, поскольку для обеспечения оптимального разделения пиков консервантов следует подбирать оптимальный состав подвижной фазы применительно к используемой хроматографической колонке. Полученную подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр. Перед использованием подвижную фазу дегазируют в круглодонной колбе под вакуумом на ультразвуковой бане.

Срок хранения подвижной фазы в плотно укупоренной посуде - не более 7 сут.

8.1.3 Приготовление основных и рабочих растворов консервантов

В качестве стандартных веществ используют бензойную, сорбиновую, пропионовую кислоты или их соли.

8.1.3.1 Приготовление основных растворов

Пробы стандартных веществ по (10,0±0,1) мг помещают в мерные колбы вместимостью 50 см. В колбы вносят около 10 см ацетонитрила для растворения бензойной, сорбиновой и пропионовой кислот или такой же объем экстрагирующего раствора, приготовленного по 8.1.1, для растворения бензоата натрия, сорбата калия и пропионата калия. Содержимое колб перемешивают до полного растворения кристаллов, после чего объем содержимого в колбах доводят до метки экстрагирующим раствором. Колбы тщательно перемешивают, получают основные растворы.

Массовые концентрации бензойной, сорбиновой и пропионовой кислот в растворах, приготовленных из самих кислот, составляют 200 мг/дм. Массовая концентрация бензойной кислоты в растворе, приготовленном из бензоата натрия, составляет 144 мг/дм. Массовая концентрация сорбиновой кислоты в растворе, приготовленном из сорбата калия, составляет 150 мг/дм. Массовая концентрация пропионовой кислоты в растворе, приготовленном из пропионата кальция, составляет 112 мг/дм.

8.1.3.2 Приготовление рабочих растворов

Из основных растворов готовят не менее пяти рабочих растворов каждой кислоты в диапазоне массовых концентраций бензойной кислоты 0,2-1,5 мг/дм, сорбиновой кислоты 0,1-3,0 мг/дм и пропионовой кислоты 0,1-2,5 мг/дм путем точного разведения основных растворов экстрагирующим раствором в мерной колбе вместимостью 100 см. Растворы дозируют с помощью пипеточного дозатора. Приготовленные рабочие растворы профильтровывают через мембранный фильтр.

Срок хранения основных и рабочих растворов при температуре (4±2)°C в плотно укупоренной посуде: бензойной кислоты - не более 6 мес, сорбиновой и пропионовой кислот - не более 2 мес.

8.1.4 Подготовка хроматографа к работе

8.1.4.1 Условия хроматографирования:

- длина волны детектора - 235 нм;

- чувствительность детектора - 0,08 единицы оптической плотности по шкале (ориентировочное значение);

- скорость потока подвижной фазы - 0,5 см/мин (ориентировочное значение);

- температура - 50°C;

- подвижная фаза - ацетат аммония с ацетонитрилом.

Проверку оптимальности условий хроматографического разделения осуществляют путем хроматографического анализа смешанного раствора бензойной, сорбиновой и пропионовой кислот массовой концентрации каждой кислоты не менее 1 мг/дм. Данный раствор готовят из основных растворов бензойной, сорбиновой и пропионовой кислот по аналогии с методикой приготовления рабочих растворов по 8.1.3.2. Для хроматографического анализа петлю инжектора полностью заполняют анализируемым раствором. Эффективность хроматографического разделения признают удовлетворительной, если коэффициент разделения пиков сорбиновой, бензойной и пропионовой кислот составляет не менее 1,3. В противном случае для достижения требуемой эффективности разделения экспериментальным путем подбирают новый состав подвижной фазы (объемную долю ацетонитрила в ней) и скорость ее потока. При невозможности достижения требуемых условий эффективности хроматографического разделения аналогичным образом проводят испытания других колонок.

Чувствительность детектора устанавливают так, чтобы высота пика сорбиновой кислоты при хроматографическом анализе рабочего раствора массовой концентрации 1 мг/дм не выходила за пределы рабочей шкалы регистрирующего устройства, но находилась вблизи ее верхней границы.

Контроль эффективности хроматографического разделения проводят не реже одного раза в две недели.

8.1.4.2 Градуировка хроматографа

Проводят хроматографический анализ всех рабочих растворов, полностью заполняя петлю инжектора. Регистрируют высоту пиков бензойной, сорбиновой и пропионовой кислот.