ГОСТ Р 54894-2012 Продукты переработки фруктов и овощей. Определение общего диоксида серы ферментативным методом

     7 Подготовка к проведению измерений

7.1 Предварительная подготовка растворов реактивов из набора реагентов

7.1.1 Подготовка реактива 1 (триэтаноламиновый буфер)

Реагент 1 из набора реагентов по 5.12 применяют, как реактив, без разбавления. Перед проведением определения реагент 1 нагревают до температуры от 20 °С до 25 °С.

Срок хранения реактива 1 при температуре 4 °С - не более одного года.

7.1.2 Подготовка реактива 2 (НАДН)

Для приготовления реактива 2 растворяют одну таблетку реагента 2 по 5.12 в 1 см реактива 1.

Срок хранения реактива 2 при температуре 4 °С - не более 7 дней.

7.1.3 Подготовка реактива 3 (НАДН-пероксидаза) и реактива 4 (сульфитоксидаза)

Реагенты 3 и 4 применяют, как реактивы, без разбавления.

Срок хранения реактивов 3 и 4 при температуре 4 °С - не более одного года.

7.1.4 Стабильность реагентов

Все реагенты стабильны при температуре 4 °С в течение одного года.

7.2 Подготовка растворов реактивов в лабораторных условиях

7.2.1 Приготовление буферного раствора триэтаноламина (0,60 моль/дм, рН 8,0)

Растворяют 5,57 г триэтаноламина в 40 см дистиллированной воды в химическом стакане. Полученный раствор доводят до 8,0 ед. рН при помощи раствора гидроксида натрия молярной концентрацией 0,1 моль/дм. Раствор переносят в мерную колбу вместимостью 50 см и доводят его объем до метки дистиллированной водой.

Срок хранения раствора при температуре 4 °С - не более 28 дней.

7.2.2 Приготовление восстановленного никотинамидадениндинуклеотида, НАДН 710 моль/дм

В химическом стакане растворяют 25 мг препарата НАДН- по 5.5 и 50 мг гидрокарбоната натрия () по 5.4 в 5 см дистиллированной воды.

Срок хранения раствора при температуре 4 °С - не более 28 дней.

7.2.3 Приготовление суспензии НАДН-пероксидазы

Растворяют необходимое количество препарата НАДН-пероксидазы по 5.6 в растворе сульфата аммония молярной концентрацией 2 моль/дм для получения суспензии с активностью 15 ед. фермента НАДН-пероксидазы в 1 см.

Срок хранения суспензии при температуре 4 °С - не более одного года.

7.2.4 Приготовление суспензии сульфит-оксидазы

Растворяют необходимое количество препарата сульфит-оксидазы по 5.7 в растворе сульфата аммония молярной концентрацией 2 моль/дм для получения суспензии с активностью 2,5 ед. фермента НАДН-пероксидазы в 1 см.

Срок хранения суспензии при температуре 4 °С - не более одного года.

7.2.5 Приготовление раствора сульфата аммония молярной концентрации 2 моль/дм

В мерной колбе вместимостью 1000 см растворяют 264 г сухого сульфата аммония в 500 см дистиллированной воды. После полного растворения сульфата аммония доводят объем раствора в колбе дистиллированной водой до метки.

Срок хранения раствора при температуре от 4 °С до 25 °С - не более 28 дней.

7.2.6 Подготовка стандартного раствора общего диоксида серы массовой концентрации 305 мг/дм