Энзимно-хроматографический метод определения фосфорорганических пестицидов в растительных продуктах и биосубстратах

     2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, х.ч.

Натрий сернокислый безводный, ч.д.а.

Н-гексан, х.ч.

Этиловый спирт ректификат

Бром

Натрий серноватистокислый - 0,1 М водный раствор (2,48 г растворяют в 100 мл воды).

Силикагель марки КСК, дробленный и просеянный через сито 100 меш

Кальций сернокислый (CaSO·2НО), ч.д.а., просушенный в сушильном шкафу при температуре 160 °С в течение 6 часов

Индоксилацетат, ч.д.а., ТУ-7П-57-69

Калий железосинеродистый - 0,05 М водный раствор (1,645 г растворяют в 100 мл дистиллированной воды)

Калий железистосинеродистый - 0,05 М водный раствор (2,11 г растворяют в 100 мл дистиллированной воды)

Буферный раствор рН - 8,69 - готовят смесь ортофосфорной (2,1 мл), уксусной (2,3 мл), борной (2,47 г) кислот и доводят дистиллированной водой до 1 л. Для получения буфера с рН 8,69 к 100 мл указанной смеси прибавляют 65 мл 0,2 н раствора едкого натра, который готовят растворением 0,800 г NaОН в дистиллированной воде в мерной колбе емкостью 100 мл.

Ферментный препарат получают из печени крупного рогатого скота (свежую, однократно замороженную и сохраняемую в дальнейшем в холодильнике печень можно использовать в течение 6 месяцев). Для приготовления ферментного раствора 1 г печени растирают в ступке с 9 мл буферного раствора, фильтруют через вату. К 1 мл полученной сыворотки прибавляют 4 мл буферного раствора и используют этот раствор для опрыскивания пластинок. Используют свежеприготовленный раствор.

Основной стандартный раствор (А) исследуемого фосфорорганического пестицида - 100 мкг/мл (10 мг пестицида в 100 мл ацетона).

Рабочие стандартные растворы готовят разбавлением основного раствора "А".

Раствор "Б" - 0,5 мл раствора "А" доводят в мерной колбе до 100 мл ацетоном (содержание пестицида составляет 0,5 мкг/мл).

Раствор "В" - 5 мл раствора "Б" доводят в мерной колбе до 25 мл (содержание препарата 0,1 мкг/мл).

Проявляющий реактив: 10 мг индоксилацетата растворяют в 6 мл этанола, прибавляют 6 мл буферного раствора, 2 мл раствора железосинеродистого калия и 2 мл железистосинеродистого калия и хорошо перемешивают. Раствор готовят непосредственно перед опрыскиванием. На пластинку расходуется 3-4 мл смеси.