Определение колиформных бактерий и E.coli с использованием хромогенных и флюорогенных индикаторных сред производства Merck (Германия). Методические рекомендации

5. Принцип действия хромогенных и флюорогенных питательных сред

Селективные хромогенные и флюорогенные индикаторные среды предназначены для ускоренного одновременного определения общих колиформных бактерий и E.coli в исследуемом образце.

Принцип действия хромогенных и флюорогенных сред основан на выявлении специфических ферментов - -галактозидазы колиформных бактерий; -глюкуронидазы и триптофаназы E.coli.

Специфическая активность ферментов проявляется в результате расщепления хромогенных и флюорогенных субстратов, входящих в состав индикаторных сред, с образованием флюоресцирующих или имеющих окраску продуктов, которые изменяют цвет (вызывают флюоресценцию) жидких сред или характерно окрашивают колонии на агаризованных средах.

На среде Fluorocult LMX Broth -галактозидаза колиформных бактерий расщепляет хромогенный субстрат (X-GAL*) с образованием окрашенного продукта, который изменяет цвет среды со светло-желтого на сине-зеленый. Фермент -глюкуронидаза E.coli расщепляет флюорогенный субстрат (MUG*) с образованием флюоресцирующего (при воздействии УФ-света) продукта.

________________

* Производство питательных сред компании Merck KGaA (Германия) имеет международный сертификат качества ISO 9001:2000.

На средах Chromocult Coliform Agar и Chromocult Coliform Agar ES -галактозидаза колиформных бактерий расщепляет хромогенный субстрат (Salmon-GAL*) с образованием хромогенного продукта, который окрашивает колонии в розовый (до красного) цвет. Ферменты -галактозидаза и -глюкуронидаза E.coli расщепляют хромогенные субстраты (Salmon-GAL и X-GLUC*) с образованием хромогенных продуктов, которые окрашивают колонии в темно-синий (до фиолетового) цвет.

________________

* См. состав питательных сред.

Фермент триптофаназа выявляется при расщеплении триптофана, включенного в состав сред Fluorocult LMX Broth и Chromocult Coliform Agar, с подтверждением образования индола реактивом Ковача.

Для целей настоящих MP применяются следующие определения:

Колиформные бактерии - микроорганизмы семейства Enterobacteriaceae, характеризующиеся наличием фермента -галактозидазы, способного расщеплять специфические хромогенные субстраты, входящие в состав селективных индикаторных сред.

E.coIi - колиформные бактерии, характеризующиеся наличием фермента -глюкуронидазы, способного расщеплять специфические хромогенные или флюорогенные субстраты, входящие в состав селективных индикаторных сред, и фермента триптофаназы, расщепляющей триптофан.

Входящие в состав индикаторных сред качественные пептоны и фосфатный буфер обеспечивают оптимальные условия роста колиформных бактерий; триптофан дает возможность проведения индольного теста для окончательного подтверждения E.coli; пируват натрия восстанавливает поврежденные клетки колиформных бактерий и повышает чувствительность метода. Селективные агенты (лаурилсульфат натрия, тергитол 7, соли желчных кислот и пропионовая кислота) ингибируют рост сопутствующей микрофлоры.

Метод одновременного определения колиформных бактерий и E.coli с использованием хромогенных и флюорогенных питательных сред является высокочувствительным, специфичным, позволяет сократить время исследования до 24 часов.