Методические указания по гигиенической оценке новых пестицидов

2.4. Изучение вредного действия пестицидов при нанесении на кожу и слизистые оболочки

Цель исследований - изучение общетоксического и местно-раздражающего действия пестицидов при поступлении через кожу и слизистые оболочки.

2.4.1. Кожно-резорбтивное действие. Путь и скорость проникновения веществ в организм через кожу зависит от их химической структуры, физико-химических свойств, в частности растворимости в воде и органических растворителях.

Водорастворимые вещества проникают в организм в основном по выводным протокам потовых желез в период торможения потоотделения, жирорастворимые - через роговый слой, волосяные фолликулы и сальные железы.

Водорастворимые вещества для животных менее опасны, чем для человека, так как животные не имеют потовых желез; для человека существует опасность суммарного поступления химических веществ в организм всеми перечисленными путями (П.П.Слынько, 1973). Это следует учитывать при переносе данных, полученных в эксперименте на животных, на человека.

Методы, рекомендованные для изучения всасывания веществ через кожу, делят на 3 группы (Ю.И.Кундиев, 1975).

1. Химическое определение в организме веществ или их метаболитов. При этом следует учитывать возможность неравномерного распределения их в различных органах.

2. Измерение убывания веществ с места нанесения. Наиболее простой является методика с погружением хвоста (на 2/3 его длины) животного (мыши, крысы) в пробирку с исследуемой жидкостью. Пробирки помещают в водяную баню с температурой 28...30 °С. Опыты с сильно летучими веществами проводят под вытяжным шкафом (голова животного находится вне шкафа). Время экспозиции - 4 ч. После окончания эксперимента кожу хвоста обмывают теплой водой. Уменьшение концентрации раствора свидетельствует о всасывании вещества через кожу. Указанные способы требуют наличия методов химического определения пестицидов и их метаболитов и поэтому не всегда применимы.

3. Оценка общей реакции организма на воздействие пестицида. Ориентировочные данные о кожно-резорбтивном действии пестицида можно получить в эксперименте описанным выше методом погружения хвоста животного в исследуемую жидкость.

Для количественной оценки кожно-резорбтивного действия наиболее удобны крысы и кролики. Перед опытом на соответствующем участке кожи (удобно на боку туловища) для крыс размером 2x2 см, для кроликов - 4х6 см удаляют шерсть (осторожно, не повредив кожу) с помощью вогнутых ножниц или электрической бритвы. Исследуемое вещество наносят в строго дозированных количествах из расчета на 1 кг массы тела. В зависимости от исходной концентрации пестициды помещают на кожу в виде растворов, суспензий, эмульсий, мазей.

Вещества изучают в максимально возможных концентрациях, а также в концентрациях, применяемых на практике. В аналогичных условиях необходимо исследовать растворители, наполнители, эмульгаторы, используемые в практике сельского хозяйства для достижения необходимой концентрации пестицидов.

Во избежание слизывания, стирания яда о стенки клетки, животных перед аппликацией фиксируют в специальных станках и помещают в вытяжной шкаф.

Удобен также следующий метод изучения токсического действия химических веществ при нанесении на кожу: на подготовленный участок наносят вещество, прикрывают слоем марли, по размеру соответствующим площади аппликации. Затем вокруг туловища, закрывая участок нанесения яда, накладывают фольгу, которую сверху крепят лейкопластырем.

При работе с летучими веществами на подготовленный участок кожи животного прикрепляют стеклянный цилиндр высотой 1...2 см (диаметр для крыс - 1,5 см, для кроликов - 2,5 см). На ограниченный таким образом участок кожи наносят исследуемое вещество, цилиндр закрывают пробкой или пластырем. Опыты проводят под вытяжным шкафом (Ю.И.Кундиев, 1975).

При всех вариантах эксперимента животные не должны находиться в фиксированном состоянии более 4 ч.

Препарат с кожи не смывают, если это не вызвано специальными целями.

Следует учитывать, что для обеспечения сопоставимости получаемых результатов условия опыта должны быть унифицированы (один и тот же вид животных, одинаковые площади аппликации, постоянное время экспозиции, один и тот же растворитель и др.).

О кожно-резорбтивном действии судят по смертельным исходам, времени появления и степени выраженности признаков интоксикации, изменению интегральных и специфических показателей.

Для веществ, вызывающих гибель животных, выводят .

Сравнительная оценка токсичности пестицидов и их способности всасываться в организм через кожу производится с помощью кожно-орального коэффициента:

Указанный коэффициент можно также рассчитать, используя вместо (доза, изменяющая исследуемый показатель, желательно специфический, на 50%).

Кожно-резорбтивную токсичность пестицидов оценивают согласно гигиенической классификации.

Если вещество малотоксично и невозможно установить , степень его кожно-резорбтивного действия и характер вызываемых в организме изменений определяют с помощью интегральных и специфических показателей. Для выбора наиболее чувствительных показателей при оценке влияния на организм нанесенного на кожу препарата следует использовать результаты опытов по введению пестицидов в желудок.

После однократного нанесения на кожу вещества в максимально возможной дозе выбранные показатели изучают в динамике через 6, 24, 48 ч в зависимости от скорости всасывания. Выявив характер действия, устанавливают дозы, вызывающие пороговые изменения наиболее чувствительных показателей (предпочтение отдается специфическим). Изменения изучаемых показателей целесообразно сравнивать (по возможности) с количественным содержанием пестицидов (их метаболитов) в крови и различных органах.

Способность веществ к кумуляции при поступлении в организм через кожу можно ориентировочно выяснить при ежедневной аппликации их в дозе, соответствующей 1/10 и 1/20 в течение соответственно 10 и 20 дней. За это время животные получают суммарно 1 . Если животные погибают и есть возможность определить при повторном нанесении, рассчитывают коэффициент кумуляции, как и при пероральном воздействии.

В течение опыта учитывают гибель животных, наблюдают клиническую картину интоксикации, проверяют массу, температуру тела. По окончании опыта животных забивают, исследуют выбранные показатели.

Способность к кумуляции малотоксичных веществ, для которых невозможно установить в остром опыте, изучают путем повторных воздействий в дробностях 1/20 и 1/10 часть дозы, оказывающей при однократной аппликации токсический эффект.

2.4.2. Местное действие на кожу и слизистые оболочки. Местное действие веществ изучают на белых крысах, кроликах и морских свинках. В течение опыта по выявлению кожно-резорбтивного действия при однократном и многократном нанесении вещества на кожу крыс обращают внимание на характер изменения кожи на месте аппликации. На морских свинках и кроликах устанавливают порог раздражающего действия вещества, учитывая концентрацию, в которой препарат наносят на кожу. Важно испытать влияние концентраций, которые могут создаваться в практических условиях.