МУК 4.2.2870-11 Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней

5.1.3. Порядок лабораторной диагностики холеры в лабораториях лечебно-профилактических учреждений

     
Отбор и транспортирование проб клинического материала

При проведении бактериологического анализа на холеру исследуется клинический материал: испражнения, рвотные массы, желчь и секционный материл от умерших, причиной смерти которых явились кишечные инфекции неустановленной этиологии.

Отбор, упаковка и транспортирование проб клинического материала для исследования осуществляются в соответствии с действующими методическими указаниями по лабораторной диагностике холеры.

Материал от больных забирает медицинский персонал ЛПУ немедленно при выявлении больного, до начала лечения антибиотиками. Кратность отбора проб - в соответствии с действующими санитарно-эпидемиологическими правилами по эпидемиологическому надзору за холерой.

В зависимости от времени забора материала и времени работы лаборатории пробы на исследование отбирают в соответствии со следующей схемой:

1. При круглосуточном режиме работы лаборатории материал забирают в нативном виде, в 5-10 мл 1%-й пептонной воды рН 8,4±0,1 (транспортная среда) или в 50 мл 1%-й пептонной воды рН 8,4±0,1 (1-я среда накопления);

2. При односменной работе лаборатории:

а) при взятии материала в 6.00-10.00 ч утра и доставке в бактериологическую лабораторию до 10 ч утра материал забирают в 5-10 мл 1%-й пептонной воды (транспортная среда) или в 50 мл 1%-й пептонной воды (1-я среда накопления);

б) при взятии материала после 10 ч утра и доставке в течение рабочего дня лаборатории материал забирают в 5-10 мл 1%-й пептонной воды (транспортная среда);

в) при взятии материала по окончании рабочего дня лаборатории и доставке в лабораторию до 10 ч утра следующего рабочего дня материал забирают в 5-10 мл 1%-й пептонной воды (транспортная среда);

г) при взятии материала в выходные дни лаборатории и доставке материала до 10 ч утра следующего рабочего дня материал забирают в 50 мл 1%-й пептонной воды с теллуритом калия (транспортная среда).

Флаконы и пробирки с 1%-й пептонной водой должны быть этикетированы с указанием названия среды и даты ее изготовления. При этом 1%-я пептонная вода хранится при температуре не выше (10±0,2) °С.

От больных тяжелой формой материал направляют в лабораторию нативным и в 1%-й пептонной воде. В транспортную среду вносят 1-2 мл или 1-2 г материала на 5-6 мл среды.

Обильные водянистые испражнения и рвотные массы в количестве 10-20 мл отбирают из индивидуального судна в стерильные контейнеры объемом 60-100 мл стерильными ложками или автоматической пипеткой переменного объема.

У больных легкими формами - 1-2 г испражнений собирают в стерильный контейнер объемом 60-100 мл или петлю (зонд) ректальную стерильную смачивают стерильным физиологическим раствором и вводят в прямую кишку на глубину 5-6 см. Материал помещают в пробирку с транспортной средой.

Желчь берут при дуоденальном зондировании в лечебном учреждении. В отдельные полимерные контейнеры объемом 60 мл собирают две порции: из желчного пузыря и желчных протоков (В и С). Материал доставляют нативным.

Пробы маркируют, обрабатывают снаружи дезинфицирующим раствором, упаковывают в полиэтиленовый пакет с застежкой-молнией, заполняют бланк-направление и помещают в контейнер (кейс) для транспортирования биологического материала на исследование.

При необходимости пробы сохраняют при комнатной температуре (24,0±1,0 °С) в биксе, ящике, шкафу в специально выделенной комнате, закрывающейся на замок.

Исследование клинического материала

Профилактические исследования клинического материала на холеру проводят в течение рабочего дня, диагностические исследования материала от больного с подозрением на холеру, а также в случае выделения культуры, подозрительной на холерный вибрион, - в условиях круглосуточного режима работы лаборатории с включением экспресс и ускоренных методов диагностики. При исследовании материала от больных холерой (подозрительных) среды накопления с ингибиторами не используются.

Методы исследования клинического материала на холеру в лабораториях ЛПУ: бактериологический и ускоренные (слайд-агглютинация, РИВ и МФА).

Все изолированные от людей культуры, подозрительные на холерные вибрионы, независимо от результатов слайд-агглютинации холерными сыворотками, передаются для дальнейшей идентификации в установленном порядке.

1. Исследование клинического материала на холеру при круглосуточном режиме работы лаборатории

I этап исследования

Посев нативного материала (испражнения, рвотные массы и др.) и материала, доставленного в транспортной среде, в первую жидкую среду накопления (1%-ю пептонную воду) и на плотные питательные среды: щелочной агар и элективную среду типа TCBS.

Материал, доставленный в 5 мл 1%-й пептонной воды полностью засевают в 50 мл среды накопления.

При доставке материала в 50 мл 1%-й пептонной воды не позже 2 ч после забора, пробу помещают в термостат на 6 ч (первая среда накопления). При доставке в более поздние сроки 5 мл материала засевают в 50 мл 1%-й пептонной воды.