ГОСТ Р 54496-2011 (ИСО 8692:2004) Вода. Определение токсичности с использованием зеленых пресноводных одноклеточных водорослей

Приложение ДВ
(обязательное)

Методы подсчета плотности (численности) клеток водорослей*

_______________

* В бумажном оригинале наименование приложения ДВ выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

ДВ.1 Определение плотности (численности) клеток водорослей методом прямого подсчета в камере Горяева

Подсчет плотности (численности) клеток водорослей в камере Горяева (см. рисунок ДВ.1) проводят следующим способом:

а - общий вид камеры Горяева

b - вид сбоку камеры Горяева

с - увеличенный фрагмент сетки для подсчета клеток водорослей - выделен один большой квадрат

Рисунок ДВ.1 - Счетная камера Горяева

Содержимое колбы с водорослями перемешивают вручную, затем пипеткой отбирают суспензию водорослей (аликвоту) и наносят по одной капле на верхнюю и нижнюю части сетки счетной камеры Горяева. Затем камеру накрывают покровным стеклом, которое притирают по бокам до появления колец интерференции.

Примечания

1 Взятую в пипетку каплю суспензии водорослей необходимо очень быстро нанести на поверхность сетки, пока клетки водорослей не успели осесть в нижней части пипетки.

2 Нанесенную на поверхность сетки каплю суспензии водорослей следует быстро накрыть покровным стеклом и притереть его во избежание оседания клеток водорослей из капли.

3 После притирания покровного стекла и при подсчете клеток водорослей под микроскопом необходимо следить за тем, чтобы жидкость под покровным стеклом была распределена равномерно.

4 Камеры Горяева обычно имеют две сетки, разделенные желобком. В таких камерах наносят параллельно две капли суспензии водорослей.

Капли суспензии водорослей наносят не подряд из одной пипетки, а при двукратном взятии суспензии в пипетку из одной и той же колбы.

Через 1-2 мин после оседания клеток водорослей камеру Горяева помещают под объектив микроскопа и подсчитывают количество клеток водорослей во всех 25 больших квадратах сетки.

Примечания

1 После подсчета клеток водорослей камеру Горяева сразу же тщательно моют водопроводной водой и протирают мягкой тканью (например, фланелью).

2 Подсчет числа клеток водорослей в камере Горяева рекомендуется проводить при плотности (численности) клеток (1,0-2,5)·10 клеток/см, так как при большей плотности (численности) клеток водорослей в суспензиях подсчет трудоемок и менее точен.

Допускается при подсчете численности клеток водорослей разбавление суспензии культуры водорослей питательной средой (например, разбавление в 10 раз при большой плотности клеток в исходной культуре, тогда численность клеток, полученную при подсчете в камере Горяева, умножают на коэффициент разбавления 10).

Плотность (численность) клеток водорослей в 1 см суспензии водорослей рассчитывают по формуле

,                                                       (ДВ.1)

где - суммарное количество клеток водорослей в учтенных больших квадратах сетки;