ГОСТ Р 54496-2011 (ИСО 8692:2004) Вода. Определение токсичности с использованием зеленых пресноводных одноклеточных водорослей

Приложение А
(рекомендуемое)

     
Определение эффективной кратности разбавления сточной воды при тестировании в течение 48 ч

А.1 Общие положения

Метод применяют для проведения тестирования очищенных сточных вод, сточных вод и других водных проб из окружающей среды с использованием различных типов испытательных емкостей.

А.2 Отбор проб и их хранение - по 4.1.

Примечание - Тестирование необходимо провести как можно скорее после отбора проб или после замораживания и оттаивания, фильтрования (центрифугирования).

А.3 Емкости для тестирования водорослей

Для тестирования водорослей используются емкости соответствующего объема, при этом материал и конфигурация емкостей должны выбираться таким образом, чтобы избежать при тестировании:

a) выделения потенциально токсичных веществ;

b) адсорбции компонентов из питательной среды в контрольной пробе;

c) потерь из-за испарения существенных компонентов анализируемых сточных вод;

d) неоднородности освещения между емкостями при тестировании и при обработках результатов тестирования.

Примечание - Наиболее подходящими емкостями для тестирования являются конические колбы вместимостью 250 см (см. 5.2).

А.4 Выбор диапазона анализируемых разбавлений (концентраций)

Готовят серию разбавлений пробы анализируемой воды, как описано в А.5. Необходимо, чтобы кратность разбавлений соответствовала геометрической прогрессии, охватывающей требуемый диапазон замедления роста плотности (численности) клеток водорослей. При использовании микрочашек или автоматизированных систем рекомендуется увеличить число анализируемых разбавлений, чтобы обеспечить соответствие этому требованию. Для определения необходимой кратности разбавлений проводят предварительное тестирование для выявления диапазона кратности разбавлений (концентраций).

Используют, по меньшей мере, по три колбы на каждое заданное разбавление (концентрацию), включая контрольную пробу, при этом исследуют пять кратностей разбавлений (концентраций), если отсутствует достаточное обоснование для другого планирования эксперимента. На основании статистических данных можно сократить число колб на каждое заданное разбавление (концентрацию) за счет увеличения числа заданных кратностей разбавлений (концентраций) и уменьшения интервала (коэффициента) между разбавлениями (концентрациями).

А.5 Приготовление анализируемых проб - аналогично 5.3.2.6 с учетом 6.4.3, при этом готовят серию анализируемых проб таким образом, чтобы все пробы имели одни и те же концентрации вводимых питательных веществ и плотность (численность) клеток водорослей. Этого можно достигнуть, например, добавлением в пробу анализируемой воды исходных растворов питательной среды [см. таблицу ДА.2 (приложение ДА)], как указано в ДА.2.2 (приложение ДА), или путем добавления в пробу анализируемой воды соответствующих объемов приготовленной питательной среды [см. ДА.2.2 (приложение ДА)], с последующим добавлением рассчитанных объемов суспензии культуры водорослей. Это позволяет проводить тестирование при разбавлениях (концентрациях) до 98%.

А.6 Контроль фона - по 5.3.3, при этом в конце тестирования не должно быть интерферирующего воздействия на рост клеток водорослей.

Примечание - Пробы контроля фона (разбавления сточных вод без добавления водорослей) необходимы для определения возможного влияния на результаты подсчета (измерения) плотности (численности) клеток водорослей (см. А.9) и внесения соответствующих поправок на фон или выбора подходящего метода подсчета (измерения).

А.7. Проверка физиологической чувствительности водорослей - по 6.3, при этом, если процедурой тестирования предусмотрено определение плотности (численности) клеток водорослей только по двум измерениям (в начале и конце тестирования) или если в качестве начальной плотности (численности) клеток водорослей используют номинальную плотность (численность) клеток водорослей и определение плотности (численности) клеток водорослей проводят только по подсчету (измерению) в конце тестирования, то тестирование с модельным токсикантом может выполняться по этой упрощенной схеме.

А.8 Тест-объекты (тест-организмы) - по 6.2.

А.9 Подсчет (измерение) плотности (численности) клеток водорослей - по приложению ДВ, при этом методы подсчета плотности (численности) клеток водорослей в камере Горяева (под микроскопом) и электронный подсчет являются предпочтительными (контрольными) методами. Однако могут использоваться другие (косвенные) методы, такие как флуориметрия (см. ДВ.2), а также турбидиметрия или фотометрия, при условии их достаточной чувствительности и довольно хорошей корреляции с плотностью (численностью) клеток водорослей. Если испытуемая проба мутная, рекомендуется флуориметрия вследствие существенно меньшего мешающего влияния мутности пробы.

А.10 Продолжительность тестирования

Продолжительность тестирования должна составлять не менее 48 ч, но может продолжаться до 72 ч.

А.11 Периодичность подсчета (измерений) плотности (численности) клеток водорослей - по 5.4.3.4, при этом для анализируемых проб сточных вод плотность (численность) клеток водорослей допускается подсчитывать (измерять) только в начале и в конце тестирования. Альтернативно допускается использовать номинальную плотность (численность) клеток водорослей в качестве их начальной плотности (численности), в этом случае подсчет (измерение) плотности (численности) клеток водорослей проводят только в конце тестирования.

А.12 Измерение рН

Значение рН допускается измерять в одной емкости с контрольной пробой в конце тестирования. При проведении тестирования в микрочашках для измерения рН может потребоваться объединение контрольных проб.

А.13 Обработка результатов тестирования - по 6.5

Обработка результатов тестирования по замедлению скорости роста клеток водорослей в процентах (см. 6.5.1 - по 6.5.3) рекомендуется для данного метода тестирования, поскольку оно достаточно независимо от уровня биомассы, условий роста клеток водорослей и продолжительности тестирования.