ГОСТ Р 54496-2011 (ИСО 8692:2004) Вода. Определение токсичности с использованием зеленых пресноводных одноклеточных водорослей

     7 Метод В*

_________________

* Наименование раздела 7 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

7.1 Сущность метода

Сущность метода заключается в регистрации изменения интенсивности флуоресценции клеток зеленых пресноводных одноклеточных водорослей в анализируемой пробе исследуемого объекта относительно контрольной пробы, определении ее токсичности и токсикологических показателей при тестировании в течение 72 ч (96 ч) в условиях переменного воздействия света и постоянной температуры.

Примечания

1 Метод применяют для определения токсичности исследуемого объекта, используя значения быстрой или замедленной флуоресценции клеток водорослей, которая отражает интенсивность фотосинтеза и прямо зависит от плотности (численности) клеток водорослей в анализируемой пробе.

2 Преимущество метода заключается в том, что метод флуоресценции позволяет определять токсичность быстро распадающихся и летучих веществ (в водных растворах веществ, сточной воде или водных вытяжках).

3 Продолжительность тестирования 72 ч указана для определения токсичности и токсикологических показателей анализируемых проб природной и сточной воды, а также анализируемых проб веществ; продолжительность тестирования 96 ч - для определения токсичности и токсикологических показателей анализируемых проб отработанных буровых растворов, твердых промышленных отходов, донных отложений, грунтов и почв.

7.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы, тест-объекты (тест-организмы) - по 5.2.

7.3 Порядок подготовки к измерению

7.3.1 Подготовка посуды - по 5.3.1.

7.3.2 Подготовка проб - по 5.3.2.

7.3.3 Подготовка прибора к измерениям - по ДВ.2.2; градуировка прибора - по ДВ.2.3-ДВ.2.6 (приложение ДВ) для метода А.

7.3.4 Подготовка тест-объектов (тест-организмов) - по ДБ.1.3.1 (приложение ДБ) с учетом требований 7.3.5 и 7.3.6.

7.3.5 Определение объема суспензии водорослей, необходимого для тестирования

7.3.5.1 Непосредственно перед тестированием колбу с подготовленными по ДБ.1.3.1 (приложение ДБ) водорослями закрывают ватно-марлевой пробкой, встряхивают вручную, выдерживают 30 мин при температуре и освещенности по 5.4.3.4, затем снова перемешивают, после чего из колбы автоматической пипеткой переносят в кварцевую кювету прибора объем аликвоты суспензии водорослей, равный объему кварцевой кюветы, затем кювету с аликвотой суспензии водорослей помещают в камеру прибора для измерения интенсивности флуоресценции водорослей.

Порядок проведения измерений - по ДВ.2.7.4 (приложение ДВ).

7.3.5.2 За значение интенсивности флуоресценции суспензии водорослей принимают среднеарифметическое из измеренных значений (за вычетом среднеарифметического из измеренных значений холостой пробы), если абсолютная величина разности между ними не превышает 5% от среднего значения.

7.3.5.3 На основании полученного среднеарифметического значения интенсивности флуоресценции суспензии водорослей (см. 7.3.5.2) рассчитывают необходимый объем суспензии водорослей для внесения в заданный объем каждой колбы (100 см) анализируемых разбавлений (концентраций), в том числе и для контрольной пробы, для проведения тестирования.

При этом значение интенсивности флуоресценции клеток водорослей в начале тестирования должно находиться в пределах 0,20-0,25, что соответствует плотности (численности) клеток 2,0·10-2,5·10 клеток/см (при коэффициенте пересчета 1·10 клеток/см).

Примечание - Коэффициент пересчета принимают равным 1·10 клеток/см, если значение углового коэффициента (наклона) градуировочной характеристики составляет 0,99 [см. ДВ.2.3, ДВ.2.5 (приложение ДВ)].

7.3.6 Проверка физиологической чувствительности тест-объектов (тест-организмов)

Приготовление растворов модельного токсиканта (двухромовокислого калия) - по 5.3.5.1, 5.3.5.2.

Тестирование анализируемых растворов модельного токсиканта проводят по 5.4.3.4 в течение 48 ч, после чего измеряют по ДВ.2.7.4 (приложение ДВ) интенсивность флуоресценции каждого раствора модельного токсиканта. При этом измерения интенсивности флуоресценции каждой аликвоты (из каждой колбы) каждой концентрации раствора модельного токсиканта проводят не менее трех раз.

Обработка результатов измерений - по 7.5.4 с учетом требований 5.3.5.4. Пример приведен в приложении ДГ (см. таблицу ДГ.2).

Если по результатам тестирования не удалось получить конкретное значение 48 ч , то для определения 48 ч модельного токсиканта используют пробит-анализ. Аналогичный пример приведен в приложении ДД.

7.3.7 Приготовление холостой пробы

Холостую пробу готовят следующим образом: в конические колбы вместимостью 250 см вносят 100 см питательной среды Прата, приготовленной в соответствии с требованиями ДА.1.2 (приложение ДА).

7.3.8 Приготовление пробы контроля фона - по 5.3.3.