МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по экспресс-определению микотоксинов в зерне, кормах и компонентах для их производства

УТВЕРЖДЕНЫ Начальником Управления ветеринарии Федерального агентства по сельскому хозяйству В.А.Апалькиным 2005 г.

Начальник отдела Управления ветеринарного надзора В.И.Белоусов

ФГУ ЦНМВЛ Г.В. Иванова, Л.П.Сатюкова

ООО "СТАЙЛАБ" А.В.Галкин

     1. Общие положения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для экспресс-определения микотоксинов в пробах зерна, кормов и компонентов для их производства методами иммунохимического анализа.

1.2. В основе процедуры анализа лежит взаимодействие антигенов с антителами. Специфическое иммунохимическое взаимодействие происходит в объеме иммуносорбента (колонки Aflascan, Ochrascan), в объеме и на поверхности полистиролового планшета (Aflaplate, Ridascreen), на поверхности мембраны (Aflacard, Ochracard) или в капиллярных каналах иммунохроматографической полоски (Rida Quick). В процессе реакции антигены (микотоксины), содержащиеся в экстрактах исследуемых образцов, образуют комплекс со специфическими антителами. Иммуносорбированные микотоксины затем эллюируются денатурирующим растворителем и наблюдаются по собственной флуоресценции (Aflascan, Ochrascan), детектируются путем непрямого конкурентного иммуноферментного анализа (Aflaplate, Ridascreen, Aflacard, Ochracard), либо методами иммунохроматографии (Rida Quick).

1.3. Основными компонентами реакции являются антигены (микотоксины), содержащиеся в экстрактах испытуемых образцов, специфические антитела к определяемым антигенам и коньюгаты определяемых антигенов с пероксидазой или коллоидным золотом.

1.4. При выборе процедуры исследования руководствуются таблицами 1-8.

Таблица 1. Определение суммы афлатоксинов B1, В2, G1 и G2

Таблица 2. Определение афлатоксина В1

Таблица 3. Определение охратоксина А

Таблица 4. Определение цитринина

Таблица 5. Определение дезоксиниваленола (ДОН)

Таблица 6. Определение фумонизина

     

Таблица 7. Определение зеараленона

      

Таблица 8. Определение Т-2 токсина

     2. Необходимое оборудование

Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104*

________________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 53228-2008. - Примечание изготовителя базы данных.

Меры массы по ГОСТ 7328

Лабораторный таймер электронный

Мельница для размола сыпучих продуктов типа ЛЗМ, блендер типа Waring или гомогенизатор типа "Ультратюракс" с частотой 8000-24000 об/мин

ИФА-анализатор (ридер), снабженный фильтром на 450 нм

Одноканальная автоматическая пипетка на 50 и 100 мкл

Одноканальная автоматическая пипетка на 1000 мкл

8-канальная автоматическая пипетка на 50 мкл

8-канальная автоматическая пипетка на 250 мкл

Наконечники для автоматических пипеток

Колба мерная 2-го класса точности вместимостью 100 мл исп.2 по ГОСТ 1770

Цилиндры градуированные 2-го класса точности вместимостью 25 мл и 100 мл

Стакан лабораторный ВН-50 ХС с меткой по ГОСТ 25336

Колба коническая со шлифом и притертой пробкой на 100 мл типа КН-1-100-29/32 по ТУ 92-891.029-91

Пробирки П-2-5-14/23 с притертыми стеклянными пробками

Стеклянные цилиндры для твердофазной экстракции

Штатив для пробирок на 10 гнезд

Воронка лабораторная В-56-80 ХС по ГОСТ 25336

Фильтры обеззоленные, красная лента, 100x15 см

Разовые фильтры на шприц или стеклянные микроволоконные фильтры GMF.

     3. Необходимые реактивы и материалы

Колонки Aflascan и Ochrascan, полоски Rida Quick, карточки Aflacard и Ochracard, планшеты Ridascreen в стандартной комплектации