ГОСТ Р ИСО 22442-3-2011 Изделия медицинские, использующие ткани и их производные животного происхождения. Часть 3. Валидация уничтожения и/или дезактивации вирусов и агентов инфекционной губчатой энцефалопатии

Приложение Е
(справочное)

     
Статистическая оценка титров вирусов и коэффициентов сокращения и оценка их достоверности*

_______________

* Данное приложение содержит текст, который первоначально относился к вирусам (CPMP/BWP 268/95, 14 февраля 1996 г.).

Титрации вирусов подвержены проблемам колебания, свойственным всем системам биологических проб. Таким образом, для определения надежности исследования необходима оценка точности вирусных титраций и выведенных из них коэффициентов сокращения, а также достоверности проб. Целью статистической оценки является установление того факта, что исследование было проведено на приемлемом уровне вирусологической компетентности.

1) Методы проб могут быть либо дискретными, либо количественными. Дискретные методы включают в себя пробы инфицированности в животных или пробы дозы, инфицирующей культуру ткани (ТСID), в которых животное или клеточную культуру оценивают как инфицированное или нет. Титры вирулентности затем измеряют, используя пропорцию инфицированных животных или культур. При количественных методах измеряемая вирулентность постоянно меняется в зависимости от ввода вируса. Количественные методы включают в себя пробы бляшек, где каждая бляшка соответствует одной инфекционной единице. Как дискретные, так и количественные пробы поддаются статистической оценке.

2) Колебания могут появиться внутри пробы в результате ошибок при разведении, статистических эффектов и различий внутри системы проб, которые либо неизвестны, либо трудноконтролируемы. Эти эффекты с большей вероятностью будут более значительными при сравнении разных прогонов проб (межпробное колебание), чем при сравнении результатов внутри одного прогона (внутрипробное колебание).

3) Пределы 95% достоверности для внутрипробного колебания и для межпробного колебания обычно должны быть порядка ±0,5 log или лучше. Межпробное колебание может контролироваться путем выбора эталонного препарата внутрилабораторного использования, оценка крепости которого должна быть в пределах приблизительно 0,5 log средней оценки приемлемости пробы, установленной в лаборатории. Внутрипробное колебание может быть оценено стандартными методами, приведенными в пособиях. В любом конкретном эксперименте, если точность титрации является ниже данных контрольных значений, исследование может быть приемлемым при обосновании.

4) Сокращение вирусной нагрузки следует вычислять с помощью вирусных титров, определенных экспериментальным путем.

Пределы 95% достоверности коэффициентов сокращения должны быть получены, когда это возможно. Они могут быть приближенно выражены как , где является пределом 95% достоверности для вирусных проб исходного материала, - пределом 95% достоверности для вирусной пробы материала после ступени.

Если после ступени дезактивации/удаления ни один образец не показывает признаков вирулентности, коэффициент сокращения невозможно оценить статистическим путем. Для получения расчета минимального коэффициента сокращения титр должен быть выражен как меньший либо равный одной инфекционной единице в объеме наиболее высокой испытуемой концентрации.

Можно ожидать, что ни один образец не покажет признаков вирулентности, особенно после мощных процессов дезактивации. Для того чтобы увеличить оценочный минимальный коэффициент сокращения эффективного процесса дезактивации, насколько возможно, необходимо опробовать наибольшее возможное количество обработанного неразведенного материала.

Необходимо учесть данные рекомендации должным образом для агентов TSE.