МР 01.016-07 Экспресс-определение окадаиковой кислоты в моллюсках с помощью тест-системы "DSP-Check", производства фирмы Parapharm Laboratories Co., Ltd, Япония

3. Принцип метода

Принцип работы тест-системы "DSP-Check" основан на методе конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА). В основе процедуры анализа лежит взаимодействие антигенов с антителами. Поставляемый в комплекте набора планшет сенсибилизирован окадаиковой кислотой.

Анализ выполняется следующим образом. Исследуемые (стандартные) образцы, препарат, содержащий антитела к окадаиковой кислоте, конъюгированные с ферментом, дозируются в лунки планшета. При инкубации планшета в течение определенного времени молекулы окадаиковой кислоты в объеме раствора и на поверхности планшета, конкурируя между собой, взаимодействуют с конъюгированными антителами к окадаиковой кислоте. В процессе конкуренции происходит иммуносорбция антител к окадаиковой кислоте на поверхности планшета, степень которой обратно пропорциональна концентрации токсина в объеме раствора.

Далее, путем промывки планшета, из лунок удаляются несвязанные конъюгированные антитела к окадаиковой кислоте.

После промывки планшета в его лунки дозируется смесь субстрата с хромогеном. В процессе инкубации, при химическом взаимодействии субстрата с хромогеном, в котором ферментный фрагмент молекулы конъюгата, связанной на поверхности лунки, выступает в качестве катализатора, образуются окрашенные продукты реакции. После определенного времени развития данной цветной реакции, в результате которой хромоген окрашивается в голубой цвет, в лунки добавляется стоп-реагент, при этом голубой цвет раствора меняется на желтый.

Оптическая плотность в лунках, измеренная на планшетном фотометре при 450 нм, обратно пропорциональна концентрации окадаиковой кислоты в исследуемых образцах.